上清液提取试剂盒方法

当外泌体在1980年初次被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肉瘤侵袭等方方面面。有研究表明肉瘤来源的外泌体参与到肉瘤细胞与基底细胞的遗传信息的交换，从而导致大量新生血管的生成，促进了肉瘤的生长与侵袭。外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体，通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成。上清液提取试剂盒方法

外泌体生物学功能：1、在心血管系统中，据报道，源自人胚胎干细胞（ESC）的间充质干细胞（MSC）外泌体可减少小鼠和猪模型中的心肌缺血和再灌注损伤；2、在免疫系统中，据报道趋化因子受体CCR5通过外泌体在细胞之间转移是细胞人类免疫缺陷病毒传染的一种机制；3、在中枢的神经系统（CNS）中，外泌体的作用是消除废物并介导大脑活动，从而阻止神经退行性疾病的发病机理；迄今为止，尚未完全发现调节外泌体-细胞结合的途径。然而，比较明显，其结合过程从外泌体识别受体细胞PM上的特定受体开始。膜受体的识别是外泌体细胞反应的基础，它可能活跃受体并随后导致相关信号通路的活跃，外泌体与PM融合或外泌体的内吞作用，从而导致蛋白质和RNA直接释放到受体细胞中。福建海洋生物外泌体外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)。

外泌体的提取、纯化和鉴定：每一个外泌体研究者较初都要为外泌体的分离提取而烦恼。选择的分离方式是利用超速离心的方式分离外泌体，并且可以选用梯度密度离心法得到纯度更高的外泌体。另外利用外泌体自身的物理化学性质所研发的各种市售的外泌体分离提取试剂盒也能达到分离效果。提取的外泌体的鉴定方式主要是通过形态学（电子显微镜技术）、粒子大小以及标志蛋白等方式实现的。近来的研究发现外泌体在比较多生理病理上起着重要的作用，如免疫中抗原呈递、瘤子的生长与迁移、组织损伤的修复等。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能，可作为疾病诊断的生物标志物。外泌体具有脂质双层膜结构，能比较好的保护其包被的物质，且能靶向特定细胞或组织，因此是一种比较好靶向给药系统。

外泌体的提取主要包括以下几种方式：1、免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验。2、PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度较高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。3、色谱法，这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不普遍。外泌体作为核酸的药物递送载体。外泌体提取在短时间（一周之内）使用，可以放在4度保存，如果长时间保存可以放在-20度或-80度保存。

酶联免疫吸附测定（ELISA）：将其中一种针对外泌体表面抗原的抗体固定在微孔板的表面上，将外泌体样品暴露于含有固定抗体的孔中，由于抗体-抗原相互作用，表达抗原的外泌体将被捕获固定在板上。将未捕获的样品内容物洗掉，并使用另一种抗体检测固定的外泌体。ELISA已用于从尿液、血浆和血清中分离出外泌体，当使用标准液（已知外泌体的量）创建标准曲线时，甚至可以进行定量。但是，此方法需要通过超速离心或超滤对样品进行预处理。同样，流场-流分离与紫外线分析仪和光散射检测器相结合已被用于分析外泌体的大小和纯度。外泌体发挥功能：将细胞或组织中多余的或者有害的分子排除，这为研究生物标志物提供了可能。植物提取试剂盒厂家

多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。上清液提取试剂盒方法

尺寸排阻色谱法（SEC）根据大小来分离样本。该技术应用了一个装有多孔聚合物珠的色谱柱，该聚合物珠包含多个孔和通道，分子根据其直径穿过。半径小的分子穿过柱子的孔迁移需要较长的时间，而大分子则较早地从柱子上洗脱下来。SEC可精确分离大分子和小分子。与离心分离方法相比，SEC分离的外泌体不受剪切力的影响，剪切力可能会改变囊泡的结构。此方法分离到的外泌体纯度较高，在电镜下大小均一，但是获取量少，所需设备特殊。此外，SEC方法与超滤相结合已被用于尿液来源的外泌体的分离和分析。上清液提取试剂盒方法

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