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外泌体的临床应用：间充质干细胞是目前较普遍使用的细胞类型，它具有自我更新，多向分化、分泌细胞因子和细胞外囊泡体、免疫调节、来源普遍等特点，在临床诊疗中取得了良好的成果。间充质干细胞来源外泌体与间充质干细胞有着相似的功能，包括修复与再生组织、阻止炎症反应及调节机体免疫，但外泌体相对于间充质干细胞又有许多优势。首先，间充质干细胞来源外泌体更稳定，更好保存，易于管理和控制，可以人为改变其内容物的种类和数量。其次，它们没有活细胞，不会像间充质干细胞那样可能会过多增殖而放大疗效或者病变导致疾病加重；另外，它有可能避免某些针对间充质干细胞的调控问题，间充质干细胞来源外泌体有代替间充质干细胞的趋势。干细胞外泌体摄取流式细胞技术是细胞和小颗粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌体定量检测的准确性也在不断上升。随着外泌体研究的不断深入，它的应用已经涉及瘤子诊疗领域、医学基础和免疫领域、寄生虫领域。脑脊液提取试剂盒公司

外泌体是细胞分泌到胞外的一种囊泡，其大小为30-150nm，具有双层膜结构和茶托状形态，含有丰富的内含物（包括核酸、蛋白和脂质等），参与细胞间的分子传递。外泌体普遍存在于细胞培养上清以及各种体液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等，同时也存在于组织样本中，如脑组织、肌肉组织、脂肪组织等。所有的细胞都能分泌外泌体，但是不同细胞分泌的外泌体不管在数量上还是在内含物中都具有比较大的差异性，这也决定了每种外泌体所行使的功能不一样。外泌体普遍参与细胞间物质运输与信息传递，调控细胞生理活动。同时，外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进瘤子发生和转移等作用；此外，外泌体还可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。外泌体分泌检测电子显微镜下外泌体大小不一，通常呈茶托样的圆形或椭圆形。

PEG沉淀法分离外泌体：通常通过将无水聚合物，如聚乙二醇（PEG），与样品混合来沉淀外泌体。PEG聚合物竞争性结合水分子，增加疏水性蛋白和脂质分子的相互结合力从而沉淀外泌体，然后通过离心分离外泌体。这种分离的方法快速，简便，可用于各种起始体积（从100μL到几毫升）适合于各种研究和临床设定。然而，这种方法缺乏选择性，PEG聚合物不只会导致外泌体小泡沉淀，还会引起其他细胞外囊泡、细胞外蛋白质和蛋白质聚集体沉淀。因此，在使用这种方法之前，必须进行样品预处理，例如过滤或超速离心，以减少较终的外泌体制剂的污染。

细胞摄取诊疗性外泌体：从树突状细胞、成纤维细胞和间充质细胞中分离出的诊疗性外泌体可对靶细胞产生特定的作用，包括新抗原呈递、免疫调节和药物有效载荷传递。诊疗性外泌体对靶细胞的影响可能是通过不同的进入或相互作用机制来控制的。完整的外泌体的进入可能包括受体介导的内吞作用、网格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞饮作用。外泌体的内容物的进入或外泌体信号的诱导可能涉及配体受体诱导的细胞内信号或融合，从而将外泌体内容物沉积到细胞质中。外泌体产生相关的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。

被特定部位的细胞获取的瘤子外泌体可为肉瘤的转移准备转移前微环境。用肺转倾向的肉瘤细胞来源的外泌体处理小鼠后可使骨转倾向的肉瘤细胞重新定向。外泌体的蛋白质组学分析发现不同部位倾向性的肉瘤细胞来源的外泌体具有不同的整合素（integrin）表达谱，整合素α6β4和α6β1与肺转有关，而整合素αvβ5与肝转有关。敲低整合素α6β4和αvβ5可减少外泌体被靶部位细胞获取，进而分别降低了肺和肝的转移。进一步研究发现外泌体整合素被细胞获取后活跃了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表达。通过临床数据分析显示外泌体整合素可作为预测肉瘤转移的部位倾向性的诊断指标。外泌体显示出了在诊疗各种疾病（如心肌病和神经病）方面的潜力。外泌体分泌抑制剂

免疫印迹或蛋白质印迹是分析外泌体较常用的方法之一，其原理是外泌体上特异性抗原与抗体结合。脑脊液提取试剂盒公司

外泌体的提取分离的方法：1、超速离心法（差速离心）：超离法是较常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢迎，但过程比较费时，且回收率不稳定（可能与转子类型有关），纯度也受到质疑；此外，重复离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量。2、密度梯度离心：在超速离心力作用下，使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层，是一种区带分离法。通过密度梯度离心，样品中的外泌体将在1.13-1.19g/ml的密度范围富集。此法获得的外泌体纯度较高，但步骤繁琐，耗时。脑脊液提取试剂盒公司

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