上海细胞支原体检测服务

美国药典USP40〈1223〉对NAT法支原体检测产品有关性能验证的要求，包括专属性、检测限（LOD）、耐用性、重现性。其中对于定量限（LOD）的定义及验证方法如下：一种备用微生物方法的检测限(LOD)定义为在规定的实验条件下，在规定体积的样品中可以检测但不一定定量的微生物的蕞低数量。这应与在抗     菌效果试验、非无菌产品的微生物检验：微生物枚举试验、非无菌产品的微生物检验:特定微生物检验、支原体检验和无菌性检验中引用的质量控制生物进行，视替代方法而定。南京正扬的支原体检测试剂盒的操作流程。上海细胞支原体检测服务

中国药典ChP2020〈9201〉对NAT法支原体检测产品有关性能验证的要求，包括检测限（LOD）、专属性、耐用性、重现性。其中对于专属性的定义及验证方法如下：检测样品中可能存在的特定微生物种类的能力。当替代方法以微生物生长作为判断微生物是否存在时，其专属性验证时应确认所用培养基的促生长试验，还应考虑样品的存在对检验结果的影响。当替代方法不是以微生物生长作为判断指标时，其专属性验证应确认检测系统中的外来成分不得干扰试验而影响结果，如确认样品的存在不会对检验结果造成影响。采用替代方法进行控制菌的检验，还应选择与控制菌具有类似特性的菌株作为验证对象。上海细胞支原体检测服务qPCR法支原体检测和方法验证。

CAR-T药物的生产制造周期一般需要2-4周，终产品的常规检测项目如外源因子检测和内毒     素检测等一般还需要花费几天甚至几十天的时间，传统的支原体检测方法如培养法和指示细胞法，全部检测周期长达一个月。由于细胞治     疗产品等新型生物制品的特殊性（货架期短），导致常规方法均无法满足细胞制品生产及患者回输的时限要求。由于传统方法检测时间长、效率低，且部分微生物由于在指定试验条件下不易生长、样品量少，致使无菌检测能力受限。南京正扬生物科技有限公司自主研发生产的支原体检测试剂盒操作便捷，只需2h即可出结果，是专注于CAR-T领域客户的选择。

常用的支原体检测方法有传统的分离培养法、指示细胞培养法（DNA染色法）、ELISA法、PCR法等。指示细胞培养法（DNA染色法）则灵敏度比较低，因背景荧光的存在，细胞轻度支原体污染不易检出；细胞裂解死亡产生碎片也会被荧光染料染色被误认为是支原体染色所致造成假阳性；另外，荧光染色法一般要求培养无污染的指示细胞作为对照，增加了检测的工作量。目前，PCR法为主流的支原体检测手段，PCR法比传统分离培养法检测时间大缩短，且灵敏度高。转染前为什么要做支原体检测？

日本药典JPXVⅢ〈G3-14-170〉对NAT法支原体检测产品有关性能验证的要求，包括检测限（LOD）、专属性、耐用性、可比性。其中对于专属性的描述及要求如下：专属性是指在样本中能够明确检测到目标核酸存在的能力。核酸扩增法的专属性依赖于引物/探针的选择和测试条件的严谨性(包括扩增和检测步骤)。选择特异的及对绝大多数支原体(柔膜体纲，如支原体属和相关种属如解脲支原体，螺原体，无胆甾原体等)保守的序列来设计引物/探针是相当重要的。核酸扩增法检测支原体种属的能力应该由章节中所列的参考支原体的实验结果来确认，而不推荐采用引物/探针与数据库比对的方法，(JPXVⅢ提供了用作检测的建议支原体种类)专属性。快捷支原体检测方法。qPCR法支原体检测注意事项

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用qPCR进行支原体检测时，哪些因素会对检测结果准确性和方法灵敏度存在较大影响？①qPCR引物探针的序列特异性：为保证方法高灵敏度和检出率，用于qPCR检测的特异序列必须是存在于高度保守区域内的稳定序列，并且需要散布在基因组上，保证不会因工艺导致的残留偏好而引起漏检。②qPCR实验室能力验证：为满足检测要求，应对实验室硬件和软件能力进行确认。实验室设计应按实验流程分区操作，每个操作区域配置相应设施、设备及耗材，建立实验室质量管理体系，考核实验人员的操作能力及数据分析解读能力等。上海细胞支原体检测服务