青海SAN HQ TF高盐核酸酶70921-202

一般来说，生物生产工艺用的核酸酶以BenzonaseTM（BenzonaseTM是Merck的注册商标）为主，能高效降解任何形式（双链、单链、线状、环状）的DNA和RNA。该酶来自于大自然界普遍存在的S.Marcescen，通过E.coli发酵生产得到。该酶的适宜反应条件是低盐浓度范围（<100mM盐浓度），且酶活随着盐浓度上升而下降，在300mM盐浓度时酶活几乎丧失。对于细胞基因药物常用的两种病毒载体LV和AAV，LV由于含有脂包膜结构一般都在生理盐条件下存在，而AAV在高盐条件下不易团聚、更稳定。而在生理盐浓度及更高浓度条件下，Benzonase活性受到抑制。SAN HQ具有合规的资质及完善的文件体系，支持制药领域严格的监管要求。青海SAN HQ TF高盐核酸酶70921-202

经典的慢病毒载体（LV）的生产工艺如下，——三质粒系统瞬时转染HEK293细胞系，转染24小时后LV由转染阳性细胞生产并排出到培养上清液中；收获上清培养液后，加入核酸酶去除HCD污染，通过澄清步骤去除大的细胞碎片等杂质；下游纯化步骤分离LV载体，纯化方法包括切向流过滤TFF、色谱纯化及超速离心；纯化后的LV病毒颗粒经过无菌过滤，更换到优化后的配方中，灌装并冷冻保存。每批Car-T生产时取对应量的LV病毒，切忌反复冻融，否则LV病毒会失活。重庆SAN HQ高盐核酸酶70921SAN HQ高盐核酸酶的改善效果与血清型无关。

大规模生产阶段，AAV/LV载体生产流程跟抗体、疫苗类药物的生产类似，主要包含上游培养、下游纯化及制剂部分。上游培养分为质粒开发、细胞扩增、三质粒共转染及病毒载体生产等步骤。下游纯化分为细胞裂解释放AAV病毒颗粒（可以通过去污剂、机械作用、高渗或冻融操作等）or收获细胞上清液得到含LV病毒原液、加入核酸酶以减少宿主细胞核酸污染、澄清是通过离心或过滤等方法去除细胞碎片和杂质等、超滤浓缩以减少后续色谱纯化体系、亲合及离子交换等纯化得到高纯度病毒载体。制剂部分主要是超滤更换缓冲液、过滤除菌及制剂灌装等。

细胞基因药物的基因递送有病毒及非病毒两种方式，其中病毒递送更为常用。在病毒递送路径中，腺相关病毒（AAV）和慢病毒（Lentivirus）是常用的两种载体；差别是病毒基因组的存在形式，AAV的基因组一般不整合到染色体中，以游离形式存在于染色体之外，且一般会表达数年之久；而慢病毒的基因组则会整合到染色体达到长期持续表达的目的。此外，其它用于基因药物的病毒载体有单纯疱疹病毒（HSV）、痘苗病毒（Vaccina Virus）、痘病毒（Poxviruses）。SAN HQ用量是Benzonase用量的1/3-1/4，酶用量更少，成本更低、工艺更简单。

基因药物常用的AAV载体有三种生产方法，分别是三质粒瞬转体系、杆状病毒表达载体体系和包装细胞体系。其中，20多年前开发的三质粒瞬转表达技术仍然占据腺相关病毒AAV生产的主流地位，其三质粒分别是Helper质粒（含E2a/b、E4和VARNA基因）、目标基因表达质粒及辅助质粒（含Cap和Rep基因）。虽然AAV病毒载体的血清型不同，但AAV的生产流程基本一致，主要有质粒共转宿主细胞HEK293、293细胞生产病毒颗粒、从细胞培养上清或/及细胞裂解液中收获病毒载体、纯化/制剂/无菌过滤/灌装等流程。鉴于生物制品药物更严格的质量要求，厂家对SAN HQ高盐核酸酶的生产及质控符合更高标准。青海SAN HQ TF高盐核酸酶70921-202

ArcticZymes厂家管控整个供应链及生产流程，协助客户进行文件审计及现场审计。青海SAN HQ TF高盐核酸酶70921-202

核酸酶活性受到很多因素影响，如盐浓度、pH、底物、温度等。因此，不同客户、不同项目中核酸酶的使用条件都不一样。目前，生物制药行业对Benonase全能核酸酶的使用比较熟悉，如生理盐或低盐浓度、脱盐操作等。对于AdV/AAV等项目，使用SAN HQ高盐核酸酶替代Benzonase时，只需提高反应体系总盐浓度到400mM-500mM即可，温度、Mg2+浓度等条件不用做任何调整，同样酶量的SAN HQ对宿主细胞DNA（HCD）的去除效果更好、病毒载体得率更高。经过工艺优化后，可以将SAN HQ高盐核酸酶的用量减少到原来的1/3-1/4，且HCD去除效果及产品得率更高。青海SAN HQ TF高盐核酸酶70921-202