陕西FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白组学

在Genovis，我们的策略是帮助客户进行中级（或亚基）分析，这是我们的工作，特别是我们的蛋白质酶切产品。完整质量和肽图谱是蛋白质表征的常用方法，我们发现，与简单但信息有限的完整质量和高度复杂但信息丰富的肽图谱相比，中级方法具有优势。通过执行中级描述，您可以生成从完整的质量实验中获得的所有信息，具有额外的优势。在对抗体进行完整质量分析时，很难明确地识别某些修饰。质谱仪器正在改进，可以更有效地分析更大的分子，但通过使用我们的SmartEnzymes，如IdeS，可以将抗体分解成更小的片段，这提高了这些实验可以执行的分辨率，因此，增加了鉴定修饰的信心。此外，你不仅能够更好地识别修改，而且你能够将它们定位到蛋白质上的单个结构域，这是你在完整水平上无法做到的。可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白连接子，例如 Gly4Ser 和 GlyxSery （GS） 以及聚甘氨酸 （G） 接头。陕西FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白组学

与IdeS不同，为了获得更均匀的度拉糖肽融合蛋白的消化产物，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白质消化该蛋白质，该蛋白由与琼脂糖珠共价偶联的GlySERIAS酶组成。通过将酶偶联到树脂上，可以增加酶与蛋白质的比率，从而可以进一步加速反应，以获得更完整的连接子消化。此外，该酶不会存在于样品制备中，可能会干扰样品分析。为了进行比较，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化过夜，或用GlySERIAS冻干1小时并在37°C下过夜消化。 为了降低样品复杂性，使用内切糖苷酶GlycINATOR冻干去除Fc聚糖，并减少链间二硫键。通过反相LC-MS对样品的分析表明，GlySERIAS Immobilized几乎完全消化了Fc结构域中的连接子，留下了接近均质的Fc/2产物，其中含有来自连接子的一个丝氨酸残基。用 GlySERIAS 冻干 1 小时或过夜消化，两者都会产生几种 Fc 产物，并附着不同数量的丝氨酸和甘氨酸残基。GLP-1肽在所有三个样品中以两种变体存在。使用GlySERIAS固定化消化的均质Fc/2能够详细研究特定于Fc区域的质量属性。此外，在样品中未观察到干扰分析的酶峰。作为补充，Fc/2 产物在用 GlySERIAS 冻干消化后残留部分连接子，有助于研究位于 GS 连接子的修饰。甘肃IdeS蛋白酶抗体酶切Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS蛋白酶）试剂盒可消化兔 IgG。

Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶 可用于 IgG 的所有人类亚类以及人源化和嵌合 IgG。该酶对其他物种的 IgG 也有活性，包括来自大鼠、猴子、兔子和绵羊的某些类别的 IgG。因此，FabRICATOR的高特异性在某些情况下会使其对铰链区域的突变敏感，并损害酶活性。来自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成，与 FabRICATOR 相比，FabRICATOR Z 在消化这些 IgG 方面具有更高的效率。然而，小鼠 IgG1 在铰链下方具有不同的序列，并且不被 FabRICATOR Z 消化。对于这种抗体种类，FabULOUS 和 FabULOUS Fab 试剂盒可用于制备 Fab 片段。

大多数商业zhiliao性抗体属于IgG类，在Fc结构域中含有N-聚糖。一个重要的关键质量属性是糖基化曲线，因为它会影响稳定性、溶解度、药效学和药代动力学特性。这种翻译后修饰可能发生在生物工艺开发和制造过程中，因此需要密切监测。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶已成为一种被接受的快速表征单克隆抗体（mAb）的分析工具。FabRICATOR在铰链下方消化IgG，产生F（ab'）2和Fc/2片段。单个FabRICATOR消解位点和质量谱的后续精度使Fc糖基化谱能够检测，从而可以监测批次间的一致性和其他关键质量属性。可用于研究特定Fc区域的质量属性，有助于研究GS连接子的修饰。

对于涉及完整Fab或Fc抗体片段的应用，需要在抗体铰链处进行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等传统酶可用于生成 Fab 片段，但非特异性酶活性需要仔细优化，以极大限度地降低多个消化位点的风险。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一个消化位点，可从人 IgG1 生成均质的 Fab 和 Fc 抗体片段。生成的片段可用于结晶和高阶结构 （HOS） 的 NMR 研究、结合研究等。在这里，我们提出了获得完整Fab和Fc抗体片段的不同策略。所得片段显示 GingisKHAN 的有效消化，用于生成完整的 Fab 片段或从依那西普上的融合 TNFR 结构域中分离 Fc。由于 GingisKHAN 的特异性消化依赖于 IgG 的天然折叠，因此在变性条件下特异性受到负面影响。为了使用SDS-PAGE分析消解效率，在加入SDS上样缓冲液之前，停止在分析样品中加入碘乙酰胺的反应。Genovis同时提供IdeS酶的纯化试剂盒。几乎完全消化了Fc结构域中的连接子，留下了接近均质的Fc/2产物。青海GingisKHANIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶

Genovis的GingisKHAN和FabALACTICA可酶切人 IgG1，获得完整Fab和Fc抗体片段。陕西FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白组学

Genovis提供FabRICATOR（IdeS）验证包。三种不同批次的冻干酶，用于验证基于FabRICATOR的分析方法。FabRICATOR（IdeS）是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶，可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体，产生均质的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATOR酶已成为生物制药行业中使用的工具，用于表征用于zhiliao用途的单克隆抗体、Fc融合蛋白、ADC和生物仿制药。每批FabRICATOR酶在释放前都经过严格的酶活性、特性和纯度测试。FabRICATOR验证试剂盒由三批冻干酶组成，使方法验证更容易。每批都附有一份分析证书。QC应用的简化方法验证；批次间变异性评估的理想形式；提高批量放行检测性能的可信度。陕西FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白组学