核酸PEI转染试剂使用注意事项

细胞转染实验是生物医学实验室中常规的研究手段，目的是把外源基因、蛋白或者小分子导入到靶细胞内。目前主要有三种主流方法：生物转染，物理转染和化学转染。其中生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体，以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等常见，其侵染效率可以达到90%以上，但常因安全性等问题，很多实验室对其敬而远之。物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因，无论哪一种都需要特定的设备，且一分钱一分货，性能好的价格也都很性感。上海曼博生物是Polysciences官方授权du jia代理商，更多关于转染试剂相关问题，欢迎咨询上海曼博生物！也欢迎关注我们的公众号：Mine-bio查看更多技术文章！回复关键词“PEI申请”可申请试用装！PEI转染试剂是一种高分子化学类转染试剂。核酸PEI转染试剂使用注意事项

对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。更多关于转染试剂相关产品信息，欢迎咨询上海曼博生物！近期还有PEIfree申请活动，欢迎咨询上海曼博生物！欢迎关注我们的公众号Mine-bio，回复“PEI转染试剂”即可领取！核酸PEI转染试剂使用注意事项有哪些不错的PEI转染试剂？

注意事项质粒质量：请务必使用高质量转染级无内质粒（推荐使用QIAGEN或者MN公司去内质粒提取试剂盒）。通过260nm光吸收测定DNA浓度，260nm/280nm比值确定DNA纯度（比值应该在1.8~2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者78bio公司血清培养细胞。近期还有PEIfree申请活动，欢迎咨询上海曼博生物！关注曼博生物公众号：Mine-bio，私信回复关键词：PEI申请，即可参加试用装申请活动。

PEIMAX粉末配置方法：1)将1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃烧杯中；2)放入搅拌转子，放置于磁力搅拌器上，设置搅拌程序以形成一个较小的漩涡；3)等待PEIMAX40K完全溶解，通常需要5分钟左右；4)用25mL塑料移液管加入1N氢氧化钠滴定至pH6.9~7.1；5)如果不小心超过7.1，则使用1N的盐酸和新的塑料移液管将pH重新滴定至6.9~7.1；6)将溶液转移到1L玻璃量筒中，加入水定容至1L；7)用无菌真空过滤膜过滤配制的转染试剂溶液；8)按需分装，4°C储存（切记不可冷冻）；注：未经配制的粉末有效期为2年。配置成液体后分装在合适的瓶子中，并且保存在4℃的转染试剂将可在6个月之内保持性能。如jin用于蛋白定性研究，分装的转染试剂可延长有效使用期至1年。如想申请PEI试用装，请关注我们的公众号：Mine-bio，回复关键词“PEI申请”，即可参加！PEI转染试剂会不会有毒性？

材料：质粒DNA指数生长的真核细胞PEI（聚乙烯亚胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI储存液（100μM）：称取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中，0.2μm滤膜过滤，储存于4℃备用。1×HBS（pH7.4）：将8.76gNaCl溶解于900ml超纯水，加入20ml1M的HEPES，调pH值到7.4，定容至1L，过滤（0.2μm滤膜）后储存于4℃备用。方法：1．细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90％）。根据细胞贴壁情况于含5％CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。更多关于PEI转染试剂相关产品技术问题，欢迎咨询上海曼博生物。

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哪个品牌的P日转染试剂转染效率更高呢?核酸PEI转染试剂使用注意事项

稳定转染方法：1.接种细胞：转染前一晚，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后，添加½体积的包含30%血清的生长培养基。若想咨询更多关于PEI转染试剂相关信息，欢迎咨询上海曼博生物！也欢迎关注公众号Mine-bio回复“PEI申请”申请试用装！核酸PEI转染试剂使用注意事项