上海蛋白免疫沉淀磁珠价格
时间：2024年08月01日
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真核生物的基因组 DNA 以染色质（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白质与 DNA 在染色质环境中的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径，而染色质免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技术是目前公认的研究此相互作用的选择，是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的技术之一。
它的基本原理是在活细胞状态下，固定蛋白质-DNA（染色质）复合物，并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法（抗体亲和）沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA，通过对目的片段的纯化与后期检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。
免疫沉淀ChIP技术选琼脂糖珠还是磁珠？上海蛋白免疫沉淀磁珠价格
免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）是一种用于研究蛋白质相互作用和纯化特定蛋白质的实验方法。
优点:
1. 特异性强：利用特异性抗体捕获目标蛋白，可以有效地从复杂的生物样本中分离出感兴趣的蛋白质。
2. 灵敏度高：可以检测到低丰度的蛋白质，包括瞬态或弱相互作用的蛋白质复合物。
3. 应用范围广：适用于多种生物样本，如细胞裂解物、组织提取物和生物流体。
4. 生物学洞察深入：能够揭示蛋白质之间的相互作用网络，有助于理解细胞内的信号传递和调控机制。
5. 可与其他技术联用：如与质谱（IP-MS）联用，可以准确鉴定蛋白质及其相互作用伙伴。
缺点:
1. 对抗体依赖性高：需要高亲和力和高特异性的抗体，抗体的质量直接影响实验结果。
2. 可能存在非特异性结合：样本中的其他蛋白质可能与抗体或固相支持物发生非特异性结合，导致背景噪音。
3. 可能影响蛋白质的天然状态：裂解和沉淀过程可能会改变蛋白质的构象和功能。
4. 实验重复性：需要多次实验来确保结果的可重复性和可靠性。
5. 样品处理：需要避免样品降解和非特异性结合，这可能需要使用蛋白酶抑制剂和适当的缓冲液条件。
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免疫沉淀RIP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ，它能够直接高效、快速结合抗体，而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构，这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触，具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同，磁珠是固体，抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ，尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力，但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多，使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之，琼脂糖珠的结合能力较强，而磁珠在得率，可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀纯化所得抗原纯度低一般有多种原因：
1. 非特异性蛋白污染
如果洗脱所得抗原纯度较低，则有几种方法可以进行优化。在结合或洗涤缓冲液中加入去污剂或其他可以降低非特异性结合的组分。使用普通微珠预纯化样本还可以降低非目标分子的共纯化。此外，还可以使用无关蛋白 (如BSA) 封闭微珠 。
2. 抗体污染
使用蛋白A、G或A/G的经典免疫沉淀实验中会出现抗体与抗原共洗脱的情况。如果共洗脱会影响下游分析，则需要使用抗体通过共价连接固定至微珠的方法进行实验，如Pierce 直接 IP 或交联 IP 的形式。
免疫沉淀ChIP抗体的选择？
ChIP（染色质免疫沉淀）实验是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的技术。以下是ChIP实验的实验设计概述：
1. 目标蛋白的选择：确定您想要研究的目标蛋白，例如特定的转录因子或组蛋白修饰。
2. 样本的准备：根据研究的需要选择合适的细胞或组织样本。
3. 抗体的选择：选择具有高特异性和亲和力的抗体，这对于实验的成功至关重要。
4. 交联：使用甲醛等交联剂将蛋白质与DNA在体内共价结合，形成稳定的蛋白质-DNA复合物。
5. 细胞裂解：裂解细胞以释放染色质，同时保持蛋白质-DNA复合物的完整性。
6. 染色质的剪切：通过超声或酶消化将染色质剪切成适当大小的片段，通常在200-1000 bp之间。
7. 免疫沉淀：使用特定抗体与目标蛋白结合，然后利用蛋白A/G磁珠沉淀复合物。
8. 洗涤和洗脱：洗涤沉淀物以去除未特异性结合的蛋白质和DNA，然后洗脱目标蛋白-DNA复合物。
9. 逆转交联：使用蛋白酶K处理样品以逆转交联，释放DNA。
10. DNA的纯化和分析：纯化DNA并使用qPCR、芯片或测序技术（如ChIP-seq）进行分析。
免疫沉淀技术的综述。深圳Co IP免疫沉淀磁珠原理免疫沉淀技术的优缺点？上海蛋白免疫沉淀磁珠价格
ChIP（染色质免疫沉淀）实验是一种强大的技术，用于研究蛋白质与DNA之间的相互作用，尤其是在转录调控、DNA修复、复制以及表观遗传学领域。然而，像所有实验技术一样，ChIP实验也有其优点和缺点。
ChIP实验的优点：
1. 体内反应的反映：ChIP提供了一种在体内研究蛋白质与DNA相互作用的方法，能够真实、完整地反映结合在DNA序列上的靶蛋白的调控信息。
2. 全基因组覆盖：ChIP技术可以覆盖整个基因组，提供关于蛋白质-DNA相互作用的视图。
3. 适用于多种蛋白质：ChIP可以用来研究组蛋白修饰、转录因子以及其他DNA结合蛋白。
ChIP实验的缺点：
1. 实验步骤繁琐。
2. 需要大量起始材料：ChIP实验通常需要大量的细胞或组织作为起始材料。
3. 交联的影响：使用交联剂可能会改变蛋白质的结构，从而影响抗体的识别和蛋白质-DNA的相互作用。
4. 染色质碎裂的分辨率：染色质碎裂的效率和分辨率直接影响ChIP的准确性，需要优化以获得结果。
5. 抗体质量：抗体的质量对实验结果至关重要，但高质量、特异性强的抗体可能难以获得或成本较高。
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