湖南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切

其他基于 IgG 的生物制药需要仔细表征和监测关键质量属性，例如氧化、糖基化和其他翻译后修饰。与抗体的克隆选择、工艺开发和稳定性研究相关的大量样品通常通过液相色谱质谱 （LC-MS） 进行分析。然而，在LC-MS之前进行足够规模的样品制备通常具有挑战性。为了解决样品制备的挑战，Genovis将半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR（IdeS）固定在磁性琼脂糖珠上，现在称为FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上，可同时快速自动消化多种抗体，促进中级表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以较少的用户交互减少实验和操作时间，降低样品处理错误的风险，同时提高通量。为了降低度拉糖肽复杂性，使用GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖，并用DTT还原链间二硫键。湖南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切

Genovis的FabDELLO在铰链上方的单个位点消化人IgG1，并在两小时内生成均质的Fab和Fc片段（Genovis的IdeS在铰链区下方的单个位点进行消化）。生成的片段可用于结晶和高阶结构（HOS）的NMR研究、结合研究等。突变的铰链区域是zhiliao性候选抗体的常见修饰，以降低效应器功能。这些突变可能会影响具有高底物特异性的酶的抗体消化效率。例如，高度特异性的FabRICATOR（IdeS）消化效率对含有常见LALA突变的抗体产生负面影响。FabDELLO作用于人IgG1铰链上方的单个暴露赖氨酸残基，能够对具有突变铰链区域的抗体进行流行的中级LC-MS分析。例如，用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab，在下铰链区域具有LALA突变，并通过反相LC-MS进行分析。消化产生均匀的Fab和Fc片段。用20mMDTT还原片段，用于中级LC-MS分析，发现产生了均相的Fc/2、轻链（LC）和Fd片段。用FabDELLO消化后观察到的定义峰显示出均匀的片段生成和酶的稳健性能。湖南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切IgASAP Sub1+2 是从丹毒梭菌克隆而来的，并在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签，分子量为 131 kDa。

Blinatumomab（一种对 CD19 和 T 细胞标志物 CD3 具有特异性的 BiTE 分子）的研究级生物仿制药在室温下用固定化过夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通过LC-MS对消解样品的直接分析表明，所有三个连接子区域均被消解，α-CD3 VL和VH链洗脱为一个色谱峰，α-CD19 VH和VL链作为单独的峰洗脱。来自连接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 结构域的小峰显示该短连接子未完全消化，表明 GlySERIAS 对短连接子的活性较低。与完整的蛋白质分析相比，四个结构域的分离提供了具有单同位素分辨率的高质量光谱。可以观察到每个结构域的几个不同变体，剩余的连接子残基数量不同。在色谱分离过程中，α-CD3 VH结构域无法从α-CD19 VH结构域完全基线分离，导致在相关质谱中观察到一些共洗脱。四个结构域的分离产生了有关在完整蛋白质水平上鉴定的蛋白质修饰位置的信息。例如，在完整水平上鉴定的 37 Da 的蛋白质修饰被分配给 α-CD3 VH 链。此外，240Da 和 320da 的两个修饰分别被分配给 α-CD3 VL 结构域。后者还含有一个带有五六个组氨酸残基的 His 标签。这些数据证明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 对包含多个柔性连接子蛋白进行质量控制的中级工作流程的强大功能。

与IdeS不同，Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一种IgA1特异性酶，可在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1，而IgASAPSub1+2特异性消化铰链上方的IgA1和IgA2m1。两种酶都产生完整且均质的Fab和Fc片段。IgASAP酶能够生成完整的单价Fab片段以及IgA的中级分析，从而促进IgA的表征，例如，在疫苗、zhiliao和诊断的开发过程中。独特的酶促工具，可实现IgA的中级表征和质量控制；生成均相的Fab和Fc片段，并保留免疫反应性；高度特异性–人IgA铰链上方的一个消化位点。Genovis已经测试了 PBS 和 150 mM 醋酸铵，并且也适用于FabRICATOR HPLC。

与IdeS不同，Genovis的GingisKHAN（Kgp）是一种半胱氨酸蛋白酶，可在铰链上方的单个位点（KSCDK/THTCPPC）消化人IgG1，产生完整且均质的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一种赖氨酸特异性蛋白酶。单一的消化位点是人IgG1三维结构的结果，使这种赖氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，则Fc上暴露的赖氨酸处可能会出现额外的消化位点。GingisKHAN需要温和的还原条件才能具有活性，并且在37°C和pH8下获得活性。还原剂（2mM半胱氨酸）与酶一起提供。GingisKHAN是从牙龈卟啉单胞菌中纯化的。该酶用于使用LC-MS表征基于抗体的生物zhiliao药物，研究Fc聚糖分析、双特异性抗体、亲和力和亲和力效应，并鉴定翻译后修饰。Genovis的GlySERIAS可以对融合蛋白、多特异性抗体。湖南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切

Genovis的策略是帮助客户进行亚基分析，特别是我们的蛋白质酶切产品，如IdeS蛋白酶。湖南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切

Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS）试剂盒可消化兔 IgG，但要在亲和步骤中捕获 Fc 片段，您需要另一种填料，而不是试剂盒中通常包含的 CaptureSelect™ Fc。如果您对处理兔IgG感兴趣，请联系Genovis团队，我们将在FabRICATOR Fab2试剂盒中提供与兔Fc相容的树脂色谱柱。使用FabRICATOR的抗体消化的简单性、速度和可重复性也意味着这种酶可以被用于质量控制应用。 QC方法需要执行简单，易于训练，高度可重复，数据易于分析，这正是您使用FabRICATOR所得到的。 因为它适用于一系列不同的IgG，这也意味着使用FabRICATOR进行QC工作的客户将能够在未来的产品中使用它。 这显示了这种酶在抗体消化中是多么的有效。湖南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切