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直接免疫荧光染色法和间接免疫荧光染色法为两种主要的染色方法。间接标记是使用特异的无荧光标记的一抗和被检测的标本反应将没有结合的抗体除去,之后将荧光标记的二抗加入,使得含有荧光的抗原-抗体-抗体混合物生成。如此操作除了步骤复杂,还会将大量的时间耗费掉,因此如今这种方法基本上很少使用了。直接标记即是在标记的时候将连接着荧光素的特异性抗体加入,相对而言,此种方法比较简单,所以普遍地应用于各个实验室。对于白血病的免疫分型来说,如TdT,MPO,cCD3,cCD79a的一些胞内抗原的检测就显得尤为重要。使细胞膜通透为胞内染色的要点。细胞分析仪能够检测各种复杂的实验样品,包括细胞外泡、微生物、免疫细胞及对细胞的特定反应。全息无标记3D显微镜供货公司
流式细胞仪的光学检测系统:流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束,垂直照射在样品流上,被荧光染料染色的细胞在激光束的照射下产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测,这种信号基本上反映了细胞体积的大小;荧光信号的接收方向与激光束垂直,经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离,形成多个不同波长的荧光信号。光电倍增管接收的信号被积分放大反转换为电子信号输入电子信息接收器,传输给与流式细胞仪相连的计算机。杭州外泌体分离分析系统供货商细胞分析仪可支持纯化细胞、分选细胞,具备高通量分析、筛选的能力。
流式细胞仪的维护保养:选择正确的荧光染料,一般原则是:低表达抗原标记高S/N(信噪比)荧光素,高表达抗原标记低S/N(信噪比)荧光素。当样品用2种以上荧光染料时,为消除干扰,需要做荧光补偿。在应用流式细胞仪软件作荧光补偿时,补偿只应用在同一个激光激发的不同荧光素之间,应避免补偿不足和过度补偿。溶液使用前,所用溶液都要进行过滤处理,以免出现沉淀物而堵塞喷嘴。流式细胞仪状态稳定后,要先排除进样针内的气泡以保证喷嘴畅通,之后再对样本进行检测。
流式细胞仪是常用的细胞分析、分选的仪器,可以对处于液流中的各种荧光标记的微粒进行多参数、快速、准确的定性、定量测定。流式细胞仪选购方法是什么?明确目的:在购买流式细胞仪之前要考虑清楚自己的实验目的,流式细胞仪并不是wan能的,比如说如果想要检测亚微分辨率的微粒,一般的流式细胞仪就都不合适。就荧光检测而言,经济实惠的新型流式细胞仪在分辨模糊昏暗的细胞群体方面,不如那些贵一点的流式细胞仪,假如需要研究分析磷酸化受体和未磷酸化受体的话,可能就要重新考虑流式细胞仪的选择了。细胞分析仪可以实现微量或单细胞检测、质量分析、生命体征监控等功能。
细胞分析仪在临床上的用途:细胞病变过程中伴随细胞DNA含量的改变,DNA非整倍体细胞是恶性疾病的特异性标志。细胞分析仪的FSC能够给出这些信息,在疾病的早期诊断和鉴别诊断中有着很重要的作用;早在80年代人们发现特定T细胞亚群可以反映AIDS患者的临床状态,而细胞分析仪可以对这些T细胞亚群进行检测,为AIDS的诊断、ZL提供有用信息。细胞分析仪借助于各种荧光染料测定一个细胞的多种参数完成白血病及淋巴瘤的诊断,准确率达90%左右,较传统形态学检查准确性提高10%~20%。细胞分析仪对淋巴细胞及其亚群数量的检测,可以探索疾病的发病机理、病程、预后,指导临床ZL方案。细胞分析仪可以通过化学反应、节段反应技术等获取细胞的生化信息。全息无标记3D显微镜供货公司
细胞分析仪通常能够对细胞的荧光显微痕迹、单细胞形态、细胞质染色体等进行分析。全息无标记3D显微镜供货公司
细胞分析仪性能的技术指标主要有荧光分辨率、荧光灵敏度、分析参数多少及分析、分选速度及纯度等。荧光分辨率是指分辨两个相邻峰的Z小距离,通常用变异系数(CV值)来表示。现在市场上主流型号的荧光分辨率小于2.0%,有的甚至在1%之内。荧光灵敏度反映了仪器探测Z小荧光光强的能力,一般用荧光微球上可测出的荧光(FITC)的Z小分子数来表示。目前细胞分析仪可以达到100以内。一般分析速度为500-10000个细胞/s,分选速度控制在1000个细胞/s以下,分选纯度>98%,有的细胞分析仪分析速度可达100000个细胞/s,分选速度可达70000个细胞/s,分选纯度>98%。全息无标记3D显微镜供货公司
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