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膜片钳技术(patchclamptechniques)是采用钳制电压或电流的方法对生物膜上离子通道的电活动进行记录的微电极技术。1989年,Blanton将脑片电生理记录与细胞的膜片钳记录结合起来,建立了脑片膜片钳记录技术(patchclamponinvitrobrainslices),这为在细胞水平研究反射中枢系统离子通道或受体在神经环路中的生理和药理学作用及其机制提供了可能性。离体的脑组织能够在一定的温度、酸度和渗透压、通氧状态等条件下存活并保持良好的生理状态。与急性分离的或培养的神经元相比,离体脑片中的神经元更接近生理状态:基本保持了在体情况下的细胞形态,神经细胞之间及神经细胞与非神经细胞之间的很多固有联系,以及较为正常完整的突触回路、受体分布、递质释放及其信息传递等功能。玻璃微电极的应用使的电生理研究进行了重命性的变化。美国全自动膜片钳市场价
离子通道结构研究∶目前,绝大多数离子通道的一级结构得到了阐明但根本的还是要搞清楚各种离子通道的三维结构,在这方面,美国的二位科学家彼得阿格雷和罗德里克麦金农做出了一些开创性的工作,他们到用X光绕射方法得到了K离子通道的三维结构,二位因此获得2003年诺贝系化学奖。有关离子通道结构不是本PPT的重点,可参考杨宝峰的和Hill的
对电极持续施加一个1mV、10~50ms的阶跃脉冲刺激,电极入水后电阻约4~6MΩ,此时在计算机屏幕显示框中可看到测试脉冲产生的电流波形。开始时增益不宜设得太高,一般可在1~5mV/pA,以免放大器饱和。由于细胞外液与电极内液之间离子成分的差异造成了液结电位,故一般电极刚入水时测试波形基线并不在零线上,须首先将保持电压设置为0mV,并调节“电极失调控制“使电极直流电流接近于零。用微操纵器使电极靠近细胞,当电极前列与细胞膜接触时封接电阻指示Rm会有所上升,将电极稍向下压,Rm指示会进一步上升。通过细塑料管向电极内稍加负压,细胞膜特性良好时,Rm一般会在1min内快速上升,直至形成GΩ级的高阻抗封接。一般当Rm达到100MΩ左右时,电极前列施加轻微负电压(-30~-10mV)有助于GΩ封接的形成。此时的现象是电流波形再次变得平坦,使电极超极化由-40到-90mV,有助于加速形成封接。为证实GΩ封接的形成,可以增加放大器的增益,从而可以观察到除脉冲电压的首尾两端出现电容性脉冲前列电流之外,电流波形仍呈平坦状。
膜片钳放大器是整个实验系统中的主要,它可用来作单通道或全细胞记录,其工作模式可以是电压钳,也可以是电流钳。从原理来说,膜片钳放大器的探头电路即I-V变换器有两种基本结构形式,即电阻反馈式和电容反馈式,前者是一种典型的结构,后者因用反馈电容取代了反馈电阻,降低了噪声,所以特别适合较低噪声的单通道记录。由于供膜片钳实验的专门的计算机硬件及相应的软件程序的相继出现,使得膜片钳实验操作简便、效率提高、效率提高滔博生物TOP-Bright专注基于多种离子通道靶点的化合物体外筛选,服务于全球药企的膜片钳公司,快速获得实验结果,专业团队,7*31小时随时人工在线咨询.在青蛙肌细胞上用双电极钳制膜电位的同时,记录到ACh启动的单通道离子电流,从而产生了膜片钳技术。
膜片钳技术:从一小片膜(约几平方微米)上获取电子信息的技术,即保持跨膜电压恒压箝位的技术,从而测量通过膜的离子电流。通过研究离子通道中的离子流动,可以了解离子输运、信号传递等信息。基本原理:利用负反馈电子电路,将前排微电极吸附的细胞膜电位固定在一定水平,动态或静态观察通过通道的微小离子电流,从而研究其功能。一种研究离子通道的电生理技术是施加负压,使玻璃微电极前沿(开口直径约1μm)与细胞膜紧密接触,形成高阻抗密封,可以准确记录离子通道的微小电流。可制备成三种单通道记录模式:细胞贴附、内面向外、外面向内,以及另一种多通道全细胞记录模式。膜片钳技术实现了小膜的隔离和高阻密封的形成。由于高阻密封,背景噪声水平降低,记录频带范围相对变宽,分辨率提高。此外,它还具有良好的机械稳定性和化学绝缘性。小膜隔离使得研究单个离子通道成为可能。不同的全自动膜片钳技术所采用的原理也不完全相同。德国细胞膜片钳专题
膜片钳技术实现了小片膜的孤立和高阻封接的形成,增宽了记录频带范围,提高了分辨率。美国全自动膜片钳市场价
资料分析:一般电学性质∶通过I/V关系计算得到单通道电导,观察通道有无整流。通过离子选择性、翻转电位或其它通道的条件初步确定通道类型。通道动力学分析∶开放时间、开放概率、关闭时间、通道的时间依赖性失活、开放与关闭类型(簇状猝发,Burst)样开放与闪动样短暂关闭(flickering),化学门控性通道的开、关速率常数等数据。药理学研究∶研究的药物,阻断剂、激动剂或其它调制因素对通道活动的影响情况。综合分析得出结沦。美国全自动膜片钳市场价
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