山东咨询EdU细胞增殖检测试剂盒原理

传统的免疫荧光染色（BrdU）检测方法需要DNA变性，抗原修复，抗原抗体过夜孵育，操作步骤复杂繁琐。并且由于BrdU抗体分子较大，嵌入DNA分子中的BrdU无法直接与BrdU抗体结合，必须先进行DNA变性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但变性的程度可能导致错误结果。如果变性不充分，会导致BrdU难以暴露，无法检测，而且变性过程从边缘向中间渗透，会导致细胞核DNA的变性不均匀，边缘模糊不清。如果变性过分，则会导致DNA断裂，甚至降解，导致核染不均一。另外，不同抗体试剂公司的抗体质量不一致，造成难以确保实验重复性，且容易产生假阳性结果。有哪些领域需要使用EdU细胞增殖检测试剂盒？山东咨询EdU细胞增殖检测试剂盒原理

细胞增殖分析是细胞生长和分化研究的关键，在药物开发阶段常用来评估化学药物的毒性和对细胞生长的控制作用。经过之后的细胞分裂阶段，各个子代细胞会从母细胞中接收到大约一半的荧光染料。采用流式细胞仪对荧光强度进行分析，即可测定出自标记结合起，单个细胞或细胞群所经历的传代数目。通常根据平均DNA含量或细胞代谢参数进行细胞增殖检测，此类分析可以报告出总细胞数目和活细胞数目，或者测定出单个细胞内的DNA合成情况。细胞增殖染料稀释分析主要基于细胞膜通透性，荧光团分子、染料进入细胞后，将会共价结合到蛋白质上的氨基基团上，从而使染料能够长时间停留在细胞中。河北正规EdU细胞增殖检测试剂盒哪家好EdU细胞增殖检测试剂盒的发展前景如何呢？

建议染色完成后立即进行荧光显微镜拍照观察；如果条件限制，请于4°C条件下避光湿润保存3天之内完成拍照。若为细胞爬片或涂片，可使用抗荧光淬灭封片剂进行封片后于4°C条件下保存及拍照检测。而EdU检测方法不需要剧烈的DNA变性，只需温和的细胞固定化和透化处理，能够较好地保护细胞形态、DNA整体结构及细胞内抗原识别位点，操作步骤更加快速、灵敏和准确。EdU与胸腺嘧啶(T)结构非常相似，而EdU染料大小只有BrdU抗体的1/500,在细胞内很容易扩散，无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)，可有效避免样品损伤，而且无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更快速便捷地反映DNA复制活性。

EdU染色(a)通过用10:1去离子水稀释10x反应缓冲液进行配制1xEdU反应缓冲液；(b)按照溶解200mg缓冲添加剂溶于1ml去离子水的比例称取适量的粉末进行溶解，即为可用的缓冲添加剂的浓度，建议现用现配；注：缓冲添加剂为白色粉末，较难准确称量，称量范围可稍微放宽，但是不应超过±20%，且该粉末较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需报废或更换。(c)按照以下的表格进行染色反应液的配制：该产品是采用成像检测方法对贴壁细胞进行检测，适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜等仪器。非贴壁细胞可在孵育EdU后进行细胞涂片处理，固定后再采用贴壁细胞的染色流程进行检测。也可以应用于流式细胞仪检测。EdU细胞增殖检测试剂盒的基本结构级应用。

EdU细胞增殖检测：EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU染料只有BrdU抗体的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等），可有效避免样品损伤，而且无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更准确地反映DNA复制活性。使用EdU细胞增殖检测试剂盒前的安全检查。山东提供EdU细胞增殖检测试剂盒优势

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EdU上的乙炔基能与生物素标记的叠氮化物(Biotinlabeledazide)通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应(Clickreaction)，其反应原理参见图1。通过点击反应，新合成的DNA会被相应的生物素探针所标记，从而可以使用适当的检测设备检测到增殖的细胞。EdU检测法中的点击反应(Clickreaction)原理图。生物素或荧光探针等标记的叠氮化物(LabeledAzide)与掺入到细胞DNA中的EdU，在铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，终使细胞DNA标记上生物素等探针山东咨询EdU细胞增殖检测试剂盒原理

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