松江区生殖疾病动物模型建模

PMID：15082495、7561688)①HE染色②关节侧视图③PCR鉴定、二、糖尿病相关动物模型1.糖尿病***1）模型构建（PMID：30826357）使用链佐星（STZ）注射ApoE-/-小鼠，建立糖尿病ApoE-/-小鼠模型，同时与ApoE-/-小鼠采用高脂喂养18周2）模型检测指标（PMID：29107826、28345659）3）生化指标检测4）超声检测5）主动脉染色检测2.糖尿病心肌病1）诱发性DCM模型模型构建（PMID：29732743）实验动物：大鼠方法：各大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素150mg·kg-1(STZ用mol·L-1，pH，现配现用)，并给予高脂饲料进行喂养。①模型检测指标血糖检测②HE染色③超声心电图2）自发性1型DCM模型3）自发性2型DCM模型3.糖尿病视网膜病变1）模型构建PMID：30862093实验动物：小鼠方法：糖尿病雄性db/db（+/+Leprdb/J）小鼠。喂养至21周2）模型检测指标①胶质原纤维酸性蛋白染色②TUNEL和HE染色DR组视网膜组织内核层及外核层结构松散，细胞排列紊乱GCL，神经节细胞层;INL，内核层;ONL，外核层三、动物模型构建总结1.临床资料合理性在纳入临床资料时，需关注特定疾病患者的流行病学趋势，即疾病易发年龄，男女比例等，同时需考虑是否与体重、基因表达等具有相关性。2.模型合理性选择合适，简便。确定研究疾病目的了解影响疾病发生的内在与外在因素。松江区生殖疾病动物模型建模

可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。实施例1：建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液50ml加入规格为10mg的医用顺铂(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中，配制成2mg/kg顺铂注射液，按照10ml/kg连续腹腔注射7天。实施例2：建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中，配制成3mg/kg顺铂注射液,按照10ml/kg连续腹腔注射7天。实施例3建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液25ml加入规格为10mg的医用顺铂(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中，配制成4mg/kg顺铂注射液,按照10ml/kg分别在***天及第八天腹腔注射。实施例4：建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中。泰州成瘤疾病动物模型建模小鼠疾病模型应用于转化医学研究中的思路与策略该研究从临床患者中筛选到潜在的致病基因。

具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对发明作进一步阐述。本发明构建了pirb基因敲入的小鼠动物模型，将pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的内含子1内。具体来说，构建一个cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya的基因盒，将其克隆进入rosa26基因的内含子1中。rosa26基因(ncbireferencesequence：)位于小鼠的七号染色体。本发明pirb基因敲入的小鼠动物模型的构建方法，具体按照以下步骤具体实施:步骤1、根据小鼠rosa26基因(genebank：))序列，利用cas-desigher软件在1号内含子设计grna靶序列，并搜索小鼠dbm-db基因组数据库基因，采用crispr脱靶效应软件cas-offinder检测潜在的脱靶位点：**终选取两个grna，grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如：seqid**:ggcaggcttaaaggctaacctgg将grna1和grna2分别与trancrrna在25℃孵育10min形成二级结构；步骤2、利用c57bl/6小鼠文库bac克隆，通过pcr扩增获得pirb基因cds的同源臂，采用in-fusion方法构建含有cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya的基因盒的质粒打靶载体，通过酶切、pcr及测序对打靶质粒载体进行验证，图1为构建好的pirb基因打靶载体的示意图。

可比性一般疾病多为零散发生,在同一时期内,很难获得一定数量的定性材料,而模型动物不仅在群体数量上容易得到满足，而且可以在方法学上严格控制实验条件，在对饲养条件及遗传、微生物、营养等因素严格控制的情况下，通过物理、化学或生物因素的作用，限制实验的可变因子，并排除研究过程中其它因素的影响，取得条件一致的、数量较大的模型材料，从而提高实验结果的可比性和重复性，使所得到的成果更准确更深入。折叠意义4有助于认识疾病的本质在临床上研究疾病的本质难免带有一定局限性。如何定义好的小鼠疾病模型？

卵巢早衰(pof)是指女性40岁前以闭经、不育、雌***缺乏及促性腺***水平升高为特征的一种疾病。一般人群中发病率为1％～3％，在继发性闭经妇女中占4％～8％，在20岁以前的发病率为％。近年来pof在育龄妇女中的发生率有逐年升高且向年轻化发展的趋势，由于卵巢早衰患者卵巢分泌的雌***量减少，即可导致一些其他疾病，如骨质疏松、泌尿生殖道萎缩、脂质代谢紊乱、心血管疾病。顺铂又称顺氯氨铂、氯氨铂、ddp、锡铂，是目前常用的金属铂类络合物，在分子中铂原子对其抗**作用有重要意义。但只有顺式才有意义，反式无效。其可与dna链交叉连接，显示出细胞毒作用。溶解后在体内无需载体转运，即可通过带电的细胞膜。由于细胞内氯离子浓度低(4mmol/l)，氯离子为水所取代，电荷呈阳性，具有类似烷化剂双功能基团的作用，可与细胞核内dna的碱基结合，形成三种形式的交联，造成dna损伤，破坏dna复制和转录，高浓度时也抑制rna及蛋白质的合成。顺铂具有抗*谱广、乏氧细胞有效、作用性强等优点，已普遍用于***睾丸*、卵巢*、子宫*、膀胱*、颈部*、前列腺*、脑*等，疗效***。但顺铂用于****有一定的毒性，会引起副作用，与卵巢的损害有直接关系，有研究表明顺铂可诱导卵巢细胞凋亡。疾病动物模型建模有加些方式？成瘤疾病动物模型建模原理

动物模型作为人类疾病的缩影。松江区生殖疾病动物模型建模

cns，pirb的功能和下游抑制性信号通路仍然未被阐明，因此迫切需要pirb的细胞和动物模型。目前对于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制剂，或者采用慢病毒转染。前者受到是否能够透过血脑屏障和抑制剂效率的影响，后者慢病毒转染在原代细胞和在体的转染效率比较低，使研究pirb的功能受到极大的限制。为解决这些问题，我们通过crispr/cas9技术建立了pirb基因敲入小鼠，将pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位点，为研究pirb在免疫系统或者神经系统的作用和机制提供了很好的工具。技术实现要素：本发明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠动物模型。松江区生殖疾病动物模型建模