河南如何使用EdU细胞增殖检测试剂盒公司

EdU标记(a)将细胞完全培养基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU标记培养基；(b)提前将2xEdU标记培养基预热，然后等体积加入到细胞原有培养基中，获得lxEdU溶液，其中EdU的终浓度为10uM；注：1)我们不建议替换全部培养基，因为这样可能会影响细胞增殖的速度；2)配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜；(c)每孔加入300ul含EdU培养基孵育细胞2小时，弃培养基；注：1)培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态；2)大多数**细胞以及粘附细胞系均可采用2小时的孵育时间(d)以lxPBS清洗细胞两次，毎次5分钟，以除去未掺入DNA的EdU残留上海东寰告诉您EdU细胞增殖检测试剂盒如何去使用呢？河南如何使用EdU细胞增殖检测试剂盒公司

EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。EdU染色(a)通过用10:1去离子水稀释10x反应缓冲液进行配制1xEdU反应缓冲液；(b)按照溶解200mg缓冲添加剂溶于1ml去离子水的比例称取适量的粉末进行溶解，即为可用的缓冲添加剂的浓度，建议现用现配；注：缓冲添加剂为白色粉末，较难准确称量，称量范围可稍微放宽，但是不应超过±20%，且该粉末较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需报废或更换。上海EdU细胞增殖检测试剂盒说明书上海东寰EdU细胞增殖检测试剂盒的运用领域。

EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)，中文名为5-乙炔基-2-脱氧尿苷，是一种新型胸苷(胸腺嘧啶脱氧核苷，thymidine)类似物，EdU可以在DNA合成过程中替代胸苷掺入到新合成的DNA中。另一方面，EdU上的乙炔基能与生物素标记的叠氮化物(Biotinlabeledazide)通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应(Clickreaction)，其反应原理参见图1。通过点击反应，新合成的DNA会被相应的生物素探针所标记，从而可以使用适当的检测设备检测到增殖的细胞。

但该方法由于有放射性污染并且很难实现单细胞检测而受到很大的限制，随后逐渐被基于抗体检测的BrdU(bromo-deoxyuridine)法所替代。BrdU法步骤繁多，且需要使用BrdU抗体，影响因素较多，稳定性比较差。并且由于BrdU法需要使用抗体，有时会和其它目的蛋白基于抗体的检测相互产生干扰。EdU法基于EdU掺入和后续的点击反应，无需使用抗体、操作便捷、检测灵敏度高，是一种在BrdU法基础上升级换代的新方法，将会逐步取代BrdU法。MTT法(C0009)、WST-1法(C0035、C0036)、CCK-8法(C0037、C0038、C0039、C0040、C0041、C0042、C0043、C0046)和CellTiter-Lumi™化学发光法(C0065、C0068)都是基于细胞活性的细胞增殖检测方法，能检测到细胞的总体增殖效果，但无法检测到单个的增殖细胞。EdU细胞增殖检测试剂盒使用时要考虑什么问题？

测定ATP水平检测细胞增殖活细胞需要不断以ATP的形式输入自由能，因此通过检测ATP的增加水平可检测细胞增殖。ATPBioluminescenceAssayKitHSII及ATPBioluminescenceAssayKitCLSII是通过经典的荧光素酶发光对ATP检测定量的试剂盒。前者主要应用于高灵敏度检测极低浓度ATP的实验，后者主要应用于当有持续信号产生而需要高重复性结果的实验。DNA的合成的检测：DNA的新组装合成是细胞生长的必要条件，故经常被用来进行细胞增殖、细胞活力及凋亡的检测。BrdU及EdU，都是胸腺嘧啶的非放射性类似物，能掺入增殖细胞的DNA中，可通过对BrdU及EdU的检测，从而对DNA的合成量进行测定。EdU细胞增殖检测试剂盒给社会带来了什么好处？上海如何使用EdU细胞增殖检测试剂盒购买

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细胞增殖能力的检测是评估细胞活性、基因毒性和抗药物效果等的基本方法。公认的精确的检测细胞增殖的方法是直接检测细胞中DNA的合成。初使用的通过检测DNA合成来检测细胞增殖的方法是放射性标记核苷掺入法，如氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷([3H]thymidine)掺入法。细胞活性的细胞增殖检测方法，能检测到细胞的总体增殖效果，但无法检测到单个的增殖细胞。这几种方法尽管都不是检测DNA合成的，但被用于替代[3H]thymidine掺入法。上述这些基于细胞活性或CFDASE的方法可以作为EdU法的补充性检测方法河南如何使用EdU细胞增殖检测试剂盒公司