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时间:2020年09月13日 来源:

外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理

已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤,这个时候考虑到得率,应该采用离心法处理,以减少过滤时的外泌体样品损失。

超滤方法纯化具体操作步骤举例

Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO)

用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]

用PBS平衡Amicon® Ultra-15 超滤管(目录号UFC901024,10 kDa MWCO) ,4000g离心 X 10 min。

从超滤管内管及收集管吸走PBS。向超滤管加入15 mL 样品。4000g 离心30 min 浓缩。倒空收集管。加入14 mL PBS 进行缓冲液置换,温柔吸打样品数次。4000g离心 30 min。从浓缩管吸回处理好的样品。(30X 浓缩)

注意 : 所有 Amicon® Ultra 超滤管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 与此操作流程兼容 * 上海超滤浓缩管代理销售哪家好?金山区默克2ml超滤浓缩管商家

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蛋白亲和纯化(无需换液和浓缩)

* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管~1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法,但溶液体积和离心时间等需要略加优化。

3次低速离心,总耗时~75分钟(含60分钟孵育时间)

1. 在Amicon® Pro上样池中加入至多1000μL亲和纯化树脂(沉降的柱床体积)和至多9 mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1 min平衡树脂。(柱床)树脂量≥ 500μL时采用2,000×g离心4 min。

2. 加入至多9 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h*,其间可温和搅动促进结合。 黄浦区浓缩管代理商上海Millipore超滤浓缩管授权代理商!

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离心方式的超滤方法进行溶液置换也被称为“渗滤”,操作时样品首先被浓缩,继而加入新的溶液,再次浓缩时,原溶液已经被换成选定的溶液。


化学相容性与溶出

样品的化学背景有时很多样而复杂,过滤的过程中很重要的一点是操作过程不应给样品带来新的污染。所以滤膜和装置与样品接触的其它部分都不能与样品中的化学成分发生反应而产生溶出污染。关于默克密理博各种微滤、超滤产品的化学相容性请参考产品使用说明书或垂询技术支持专线 。回收率及其重要性超滤的**终目的常常是很大程度地回收目标溶质,但膜的很多特性会对这一目的产生影响。影响回收的因素包括:• 标称分子量限制(NMWL)/ 核酸截留分子量(NCO)• 截留 • 浓差极化 • 通量

默克密理博 Amicon® Ultra 离心式超滤管因其完美的设计

一经推出即成为生物样品操作的行业**产品。不论是蛋白、

核酸、***或颗粒物,抑或低浓度样品或宝贵的活性样品,

Amicon® Ultra 都能兼顾高回收率和操作的方便性及标准

化,并满足下游各种应用的要求,使研究者处理样品时倍感轻

松。

Amicon® Ultra 超滤管的独特优点:

有效浓缩同时保证比较高的蛋白回收率

合理的死体积设计

•避免样品离干而降低回收率

•便于估计和控制样品浓缩倍数

•重复性好,便于样品数据相互比较 超滤浓缩管的优缺点您知道吗?

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特点与优点:

特别的反转离心回收设计,滞留体积很小,样品损失少,

样品回收率通常>90%

浓缩倍数达到50-200倍

Ultracel®再生纤维素膜和聚丙烯外壳将吸附降至比较低

特别设计的死体积防止离干,保证样品回收率和活性

有四种截留分子量供选择

法医gDNA鉴定、PCR产物纯化与小分子分离

Microcon® 超滤管

Microcon®为横膜式超滤管,没有死体积,用于大分子样品的浓缩、脱

盐、换液都非常高效方便。实际应用中还常用于大分子与其它分子的分

离,比如蛋白酶切后的处理及药物结合率分析等等。 上海超滤浓缩管销售公司。宝山区默克0.5ml超滤浓缩管咨询报价

Millipore超滤浓缩管用于蛋白超滤、浓缩、除盐!金山区默克2ml超滤浓缩管商家

通量(超滤效率)及其影响因素

超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得比较好的效果。滤膜的

通量的定义是流量除以面积,使用高 NMWL 滤膜可以增加通量,但同时

会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参

与影响通量的因素很多,包括:

压力:较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时,流量随着跨膜压力

(TMP)的增大而增加。正压条件下操作,如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯,

这种因素影响较为明显。如果极化影响***,通量会达到一个平台,甚

至可能随着压力的增加而降低。 金山区默克2ml超滤浓缩管商家

上海益启生物科技有限公司是一家 从事生物科技(除生物试剂)领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让;室内外装潢;建筑工程设计与施工;展览展示服务;计算机及配件、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、民用物品、易制毒化学品)实验室设备、服装服饰及辅料、仪器仪表、电子数码产品、普通劳防用品、文体用品的销售。的公司,致力于发展为创新务实、诚实可信的企业。益启生物拥有一支经验丰富、技术创新的专业研发团队,以高度的专注和执着为客户提供试剂,耗材,科研试剂,仪器设备。益启生物继续坚定不移地走高质量发展道路,既要实现基本面稳定增长,又要聚焦关键领域,实现转型再突破。益启生物创始人张文渊,始终关注客户,创新科技,竭诚为客户提供良好的服务。

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