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通量（超滤效率）及其影响因素

超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得比较好的效果。滤膜的

通量的定义是流量除以面积，使用高 NMWL 滤膜可以增加通量，但同时

会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参

与影响通量的因素很多，包括：

压力：较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时，流量随着跨膜压力

（TMP）的增大而增加。正压条件下操作，如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯，

这种因素影响较为明显。如果极化影响***，通量会达到一个平台，甚

至可能随着压力的增加而降低。 买超滤浓缩管 找益启生物公司。静安区离心浓缩管联系人

对于慢***推荐Amicon® Ultra 100kDa; 对于腺***推荐Amicon® Ultra 50kDa。具体的操作步骤可以参考***浓缩纯化试剂盒FTLV00003和FTAV00003的产品使用说明书。另提供AAV（腺相关***）的制备方法供参考。

去污剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度（Critical Micelle Concentration, CMC）时，去污剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果。

Amicon® Ultra超滤膜含有微量甘油。如果此成分干扰分析，可用缓冲液或Milli-Q®水预清洗。如果干扰仍然存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。 奉贤区Merck离心浓缩管规格上海 超滤浓缩管代理销售推荐益启生物公司。

外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理

已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤，这个时候考虑到得率，应该采用离心法处理，以减少过滤时的外泌体样品损失。

超滤方法纯化具体操作步骤举例

Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO)

用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]

用PBS平衡Amicon® Ultra-15 超滤管(目录号UFC901024,10 kDa MWCO) ，4000g离心 X 10 min。

从超滤管内管及收集管吸走PBS。向超滤管加入15 mL 样品。4000g 离心30 min 浓缩。倒空收集管。加入14 mL PBS 进行缓冲液置换，温柔吸打样品数次。4000g离心 30 min。从浓缩管吸回处理好的样品。(30X 浓缩)

注意 : 所有 Amicon® Ultra 超滤管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 与此操作流程兼容 *

如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用上一分子量级别的超滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。

2）如果目的样本也不在滤过液中，那么：

a）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？

c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是的，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。 益启生物公司专业致力于 超滤浓缩管代理销售。

脱盐/缓冲液置换并浓缩

5次低速离心，总耗时~35分钟

1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。

2. 优化选做：加入1.5 mL用于置换的缓冲液，1,000×g离心1 min。

3. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。

4. 加入1.5 mL样品，4,000×g离心15 min进行浓缩。

5. 加入1.5 mL需要置换的缓冲液，4,000×g离心15 min，换液的同时进行浓缩。

6. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管，1,000×g离心回收处理好的蛋白。

* 进行较大体积操作时，可以适当延长离心时间，也可参考Amicon® Pro完整操作说明书

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这种小管适合在1.5mL离心机中使用，其Ultracel®超滤膜对于蛋白及其它成分都表现出

极低的非特异性结合，连同医药级O型圈封闭设计，确保更少的样品丢失，更稳定的数据结果。诸多考虑周到的精细设计使Microcon®成为比较好用的样品制备工具之一。

特点与优点：

低吸附膜和反转回收设计，即使是小体积、低浓度样品得率也能达到95%以上

可以用产品自带的1.5mL样品收集管存储滤过液和浓缩产物

浓缩倍数可达100X

操作简便快捷，易于标准化。

Microcon® DNA Fast Flow 超滤管

专门设计用于从含有SDS的溶液中浓缩和回收基因组DNA。管子和膜均为低非特异性吸附的材质，医用级O型圈密封，保证了在洗涤步骤中样品丢失**少。反转回收设计，即使样品量很小也能获得理想的得率，浓缩倍数可以达到20X。 静安区离心浓缩管联系人

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