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多台同时操作模式

借助Amicon®超滤杯多台操作连接装置可以同时运行多达3个超滤杯。

Amicon® stirred cells 耐溶剂型搅拌式超滤杯

用于对在有机溶剂中的样品进行浓缩和缓冲液置换。有 47mm 和 76mm 两种规格。需要注意醛、酮（如丙酮）、醚酯等会降低碳氟化合物材质 O 形圈的使用寿命。

特点与优点：

采用圆柱形硼硅酸盐玻璃容器和 PTFE

超好化学兼容性超滤膜

可预装膜后进行高压灭菌

直接从上面操作，避免拆卸装置的麻烦

组件少，易于清洁和组装

配套使用 47 或 76 mm 直径预切膜片

应用：

带有有机成分的样品的浓缩、换液 益启生物公司专业致力于 超滤浓缩管代理销售。长宁区浓缩管联系人

抗体标记

适合25-200μg样品操作

5次低速离心，总耗时~50分钟

1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。

2. 加入抗体样品

• 对于比较稀释的样品（< 1 mg/mL）

- 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管（建议使用50k MWCO）。

- 加上至多1 mL抗体样品， 4,000×g离心15 min。

• 对于浓度较高的的样品（≥ 1 mg/mL）

- 在Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管（建议使用50k MWCO）中加入至多100μL样品。

- 将装有样品的Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管接在Amicon®Pro上样池的下端。

3. Amicon®Pro上样池内加入预先准备好的1.5 mL含有染料的反应混合液。

4. 4,000×g离心15 min。

5. 优化选做：将样品在室温下多孵育30 min。

6. 上样池中加入1.5 mL PBS± NaN3。

7. 4,000×g离心15 min换液同时浓缩。

8. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管1,000×g离心回收标记好的抗体。 闵行区默克2ml超滤浓缩管一级代理超滤浓缩管代理销售哪家比较靠谱。

提供的超滤管是没有经过去内***处理的，同时由于内***通常以多聚体的形式存在，大小

在10-1000KD之间不等，在超滤的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH预清洗，随后用Milli-Q®水/缓冲液清洗的步骤去除大部分内***。关于针对Amicon®,Microcon® , Centricon®尝试过的内***去除方案。

Amicon® Ultra超滤管使用的是再生纤维素膜，这种材质是蛋白吸附比较低的超滤膜。但是对于一些疏水性蛋白或非极性蛋白，它们和膜的非特异吸附可能会增强，对于这种情况，可以尝试在实验前对超滤管进行封闭处理。也可以尝试换成Amicon® Ultra 0.5或2来进行实验，通过减小膜面积来降低非特异性吸附。

外泌体的精制磁珠法富集精制外泌体：300μg样品（相当于300μg总蛋白）用含有5μg anti-CD63抗体的溶液稀释，与protein A/G磁珠共孵育1hr，漂洗后用0.2M glycine洗脱。如果要先将抗体偶联在磁珠上（以避免抗体洗脱下来对外泌体的干扰），请参考默克磁珠操作说明书。（Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3)）。推荐使用试剂目录号信息：cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。

默克已经建立了基于“微滤+超滤”的外泌体制备操作标准，相较于需要昂贵的设备及繁琐操作的超速密度梯度离心，用实验室常见的工具解决外泌体制备的高大上问题，真是惠而不费，不亦乐乎？ 益启生物公司的 超滤浓缩管种类繁多。

近年来随着分离纯化技术的提高，关于外泌小体的研究成果颇丰；这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索，已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求，以及起始样品的规模、数量，可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒，对操作人员也没有特别的经验要求，超滤法后来居上，成为实验室中制备外泌体的通用方法。买超滤浓缩管 找益启生物公司。南京默克4ml超滤浓缩管商家

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如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用上一分子量级别的超滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。

2）如果目的样本也不在滤过液中，那么：

a）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？

c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是的，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。 长宁区浓缩管联系人

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