宝山区Millipore超滤浓缩管商家

时间:2020年10月18日 来源:

无血清样品选择 3kDa 孔径是为了尽可能提高外泌体的回收率。

有血清样品选择100kDa/500kDa孔径是为了尽可能去除细胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌体的白蛋白造成的影响。

研究者可根据样品的粘稠程度,以及需要制备的目标外泌体 / 囊泡 / 颗粒的大小分布来选择和优化超滤孔径(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa),以便达到更好的得率和操作体验。

样品体积大于 30mL 时可以考虑用超滤杯或 Centricon-70 超滤管,请注意搅拌式超滤杯在200mL 以内时吸附损耗可能较离心式超滤管略偏高。如需进一步提高特定外泌体的纯度,可选用包被相应抗体的磁珠进行亲和纯化精制。 你知道上海超滤浓缩管代理销售哪家比较好吗?宝山区Millipore超滤浓缩管商家

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 加入漂洗缓冲液(体积是树脂柱床体积的7.5倍)并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min;≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。

4. 使用一个新的50 mL离心管作为收集管。

5. 加入洗脱缓冲液(体积是树脂柱床体积的5倍)与树脂混匀并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min;≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。回收管中即纯化好的蛋白。

6. 如果是纯化抗体,在纯化产物中加入中和缓冲液。

* 进行较大体积操作时,可以延长结合反应时间,并用胶带密封上样池上沿以便颠倒混匀操作。离心前去除胶带即可。选购不带Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管的Amicon® Pro时请使用目录号ACS500024。 嘉定区Merck超滤浓缩管咨询报价买超滤浓缩管 找益启生物公司。

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 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。

6. 加入1 mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5 min。

7. 4,000×g离心15 min。

8. 加上蛋白样品**终需要的缓冲液1.5 mL。4,000×g离心15 min,置换缓冲液的同时进行浓缩。

9. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管,1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。

* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管~1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法,但溶液体积和离心时间等需要略加优化。

用Protein A或G对抗体进行亲和纯化

蛋白亲和纯化(无需换液和浓缩)

* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管~1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法,但溶液体积和离心时间等需要略加优化。

3次低速离心,总耗时~75分钟(含60分钟孵育时间)

1. 在Amicon® Pro上样池中加入至多1000μL亲和纯化树脂(沉降的柱床体积)和至多9 mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1 min平衡树脂。(柱床)树脂量≥ 500μL时采用2,000×g离心4 min。

2. 加入至多9 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h*,其间可温和搅动促进结合。 超滤浓缩管应用领域你知道吗。

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特点与优点

温和的磁力搅拌避免发生聚集和剪切变性

所有型号都可以高压灭菌

提供 3 种规格共选择,用于浓缩 3mL - 400mL 及更大体积样品

浓度达 10% 的溶液依然可以获得高流速

应用:

大分子(如蛋白、酶、抗体和***)溶液的浓缩和缓冲液置换

渗滤(Diafiltration)模式

非连续渗滤是换液的一种操作方法,即先浓缩到一定浓度再稀释到起始的体积,并多次重复这个操作,直到溶液中的盐或溶剂被

去除或降到需要的浓度。而连续渗滤(保持恒定体积)是将超滤杯经转换装置(目录号6003)与补液杯(目录号6028)连接,

使供气压和液体流转。连接有转换装置时,不必停下系统的运转就可以即时进行浓缩和渗滤之间的切换,将两种操作模式的优点

集中在一起,有利于敏感的(蛋白)样品在**恒定、温和的条件下高效换液。 Millipore超滤浓缩管用于蛋白超滤、浓缩、除盐!嘉定区默克2ml超滤浓缩管代理商

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近年来随着分离纯化技术的提高,关于外泌小体的研究成果颇丰;这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索,已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求,以及起始样品的规模、数量,可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒,对操作人员也没有特别的经验要求,超滤法后来居上,成为实验室中制备外泌体的通用方法。宝山区Millipore超滤浓缩管商家

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