浓缩管订购
Amicon® Ultra超滤管的膜材质为默克密理博特有的 Ultracel® 再生纤维素膜,生产工艺严格,截留分子量明确而精细,蛋白吸附损失基本上大概小。
如果要用超滤的方法分离两种蛋白,那么这两个蛋白的大小需要相差多少?
按照经验,建议两个蛋白的分子量要相差一个数量级(10倍)。
Amicon® Ultra与70%乙醇是兼容的,但是对灭菌处理的具体方法没有做相关的测试,所以无法提供更进一步的参考信息。
Amicon® Ultra都是采用热封设计,不可以用高压高温灭菌。
不保证超滤管不包含RNA酶,建议用0.1% DEPC在37度浸泡2小时,以完全灭活RNA酶;残留的DEPC可以用Milli-Q®超纯水洗涤除去。 上海超滤浓缩管哪家比较好?浓缩管订购
如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话,那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响浓缩效果,建议选用上一分子量级别的超滤管(如原本选用30k,此时可以选择10k)。
2)如果目的样本也不在滤过液中,那么:
a)蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL? b)用来确定样本浓度的方法是什么?是否可信?
c)目的蛋白是不是沉淀了?如果是的,具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。 常州Merck离心浓缩管哪家优惠超滤浓缩管的优势您了解多少呢?
加入漂洗缓冲液(体积是树脂柱床体积的7.5倍)并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min;≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。
4. 使用一个新的50 mL离心管作为收集管。
5. 加入洗脱缓冲液(体积是树脂柱床体积的5倍)与树脂混匀并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min;≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。回收管中即纯化好的蛋白。
6. 如果是纯化抗体,在纯化产物中加入中和缓冲液。
* 进行较大体积操作时,可以延长结合反应时间,并用胶带密封上样池上沿以便颠倒混匀操作。离心前去除胶带即可。选购不带Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管的Amicon® Pro时请使用目录号ACS500024。
通量(超滤效率)及其影响因素
超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得比较好的效果。滤膜的
通量的定义是流量除以面积,使用高 NMWL 滤膜可以增加通量,但同时
会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参
与影响通量的因素很多,包括:
压力:较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时,流量随着跨膜压力
(TMP)的增大而增加。正压条件下操作,如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯,
这种因素影响较为明显。如果极化影响***,通量会达到一个平台,甚
至可能随着压力的增加而降低。 益启生物公司就带您了解一下 超滤浓缩管的特点。
特别推荐应用(提供实验报告作为参考)
Microcon®超滤管:
Microcon®PCR 级超滤管:
• 法医鉴定分析的DNA样品制备
• 生物大分子样品浓缩、脱盐及缓冲液置换
• 体外合成mRNA的纯化
• 以人mRNA或总RNA制备荧光DNA探针
• 游离标记物的去除
• 纳克级核酸的定量回收及大片段DNA完整性研究
• 替代乙醇沉淀,离心法高效浓缩基因组DNA
应用指南
典型应用
肽及生长因子浓缩
蛋白浓缩与脱盐
电泳等操作前的蛋白样品浓缩
HPLC前去除蛋白
组织培养抽提物和细胞裂解液中大分子成分的纯化
生物样本浓缩(抗原,抗体,酶等)
从含有SDS(或无SDS)的缓冲液中浓缩gDNA
核酸浓缩与脱盐(单链或双链核酸)
去除标记核苷酸
去除标记氨基酸
从扩增的DNA产物中去除引物
克隆前去除连接序列(linker) 上海超滤浓缩管代理销售电话多少?杨浦区默克15ml超滤浓缩管联系人
超滤浓缩管的好处您了解多少呢?浓缩管订购
脱盐/缓冲液置换并浓缩
5次低速离心,总耗时~35分钟
1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。
2. 优化选做:加入1.5 mL用于置换的缓冲液,1,000×g离心1 min。
3. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。
4. 加入1.5 mL样品,4,000×g离心15 min进行浓缩。
5. 加入1.5 mL需要置换的缓冲液,4,000×g离心15 min,换液的同时进行浓缩。
6. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管,1,000×g离心回收处理好的蛋白。
* 进行较大体积操作时,可以适当延长离心时间,也可参考Amicon® Pro完整操作说明书
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