浦东新区超滤浓缩管报价

截留

截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近

的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH 或离子强

度改变的情况下倾向于聚集或改变构象，因此其有效大小可能比 “天然”

分子大恨多，从而导致排阻增加。比如，有些蛋白质在某些缓冲液条件下

会发生多聚化，而另一些则发生解聚（如血红素蛋白）成亚基。这使选择

合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验，我们通常推荐选择

为目的分子大小一半的膜作为尝试的优先，再根据实际情况加以调整。 益启生物公司专业 从事超滤浓缩管代理销售。浦东新区超滤浓缩管报价

如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用上一分子量级别的超滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。

2）如果目的样本也不在滤过液中，那么：

a）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？

c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是的，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。 黄浦区默克离心浓缩管批发超滤浓缩管代理销售哪家比较靠谱。

抗体标记

适合25-200μg样品操作

5次低速离心，总耗时~50分钟

1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。

2. 加入抗体样品

• 对于比较稀释的样品（< 1 mg/mL）

- 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管（建议使用50k MWCO）。

- 加上至多1 mL抗体样品， 4,000×g离心15 min。

• 对于浓度较高的的样品（≥ 1 mg/mL）

- 在Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管（建议使用50k MWCO）中加入至多100μL样品。

- 将装有样品的Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管接在Amicon®Pro上样池的下端。

3. Amicon®Pro上样池内加入预先准备好的1.5 mL含有染料的反应混合液。

4. 4,000×g离心15 min。

5. 优化选做：将样品在室温下多孵育30 min。

6. 上样池中加入1.5 mL PBS± NaN3。

7. 4,000×g离心15 min换液同时浓缩。

8. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管1,000×g离心回收标记好的抗体。

浓度：当需要截留的样品浓度很低时，通量通常不受浓度影响。操作过

程中，随着溶质浓度的升高，增加的粘滞性和极化将导致通量降低。

温度：粗体，作为获得压力、浓度一样的词条通常增加操作时的温度可

以提高超滤效率。每增加 1℃蛋白扩散率增加 3-3.5%，同时溶液粘度降低。

实践中一般是以样品和设备能耐受的比较高温度来操作。

pH：改换溶液和 / 或 pH 常常改变分子结构，蛋白尤其如此。在蛋白的 pI

值蛋白会沉淀，产生堵塞和得率损失。

污垢：溶液中除了目的分子造成的浓差极化，还有其它小颗粒和分子会

在膜上富集和沉淀，逐渐堆积在膜孔上或膜孔结构中，形成结晶和沉淀。 上海超滤浓缩管销售公司。

 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。

6. 加入1 mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5 min。

7. 4,000×g离心15 min。

8. 加上蛋白样品**终需要的缓冲液1.5 mL。4,000×g离心15 min，置换缓冲液的同时进行浓缩。

9. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管，1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。

* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管～1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法，但溶液体积和离心时间等需要略加优化。

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对于慢***推荐Amicon® Ultra 100kDa; 对于腺***推荐Amicon® Ultra 50kDa。具体的操作步骤可以参考***浓缩纯化试剂盒FTLV00003和FTAV00003的产品使用说明书。另提供AAV（腺相关***）的制备方法供参考。

去污剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度（Critical Micelle Concentration, CMC）时，去污剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果。

Amicon® Ultra超滤膜含有微量甘油。如果此成分干扰分析，可用缓冲液或Milli-Q®水预清洗。如果干扰仍然存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。 浦东新区超滤浓缩管报价

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