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除非您正在研究组蛋白和组蛋白修饰,否则您应采用X-ChIP方案,以使您的靶蛋白与DNA的连接稳定。增加交联时间。 蛋白G磁珠能结合更大范践的执体,包括小鼠单克境抗体,为达到抗体选择的比较大灵活性,我们推荐使用蛋白A/G混合物(目录号16-663)。检测PCR引物的效果。加入相应的时维物,必要时重新设计引物。
关于ChIP中关键步骤的详细讨论及实验问题解答,请参考默克密理博染色质免疫沉淀指南(ChIP实验指南)。
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这是为了避免或尽量减少冻融循环。抗体溶液不可反复冻融,因为这可以导致抗体。
聚集,从而引起活性丧失。因此,贮存溶液应在保存前先进行分装。未稀释抗体应在保存于-20℃之前分装,以尽量减少可使抗体变性的反复冻融循环。集中保存抗体可预防或尽量减少降解。可在抗体溶液中加入终浓度为50%的冷冻保护剂,如甘油,以预防冻融造成的损失。请勿将含甘油的抗体保存于-80℃。通常不对酶结合抗体进行冷冻,以免损失酶活性及其结合能力。 青浦区MYC抗体抗体代理价格上海标签抗体哪家靠谱?
随着药物研发和蛋白研究水平的快速增长,人们希望能在有限的样本中快速获得和分析大量数据用于疾病早期诊断,个性化***及药物开发等多个方面。而采用传统的“单重”蛋白检测法,如ELISA或蛋白免疫印迹分析法,获得这些信息越来越困难、不实际或受成本限制。因为多因子检测法允许在单独一份复杂和非均质样品中检测多重分析物,所以当分析血清、脑脊液、腺体分泌物或其它生理样品时,经证实这种方法是特别有效的。多重蛋白检测的方法常以双抗夹心法为基础,或固定在芯片上作为“平面阵列”或结合于微珠作为“悬浮阵列”。
对于探索性研究,Western blotting仍是优先平台,是用于评估新抗体和其它蛋白检测分析
法(如ELISA、基于微珠的分析法、流式细胞术和免疫组织化学)的标准。新技术的开发**减少Western blotting过程需要的时间(例如默克密理博的 SNAP i.d.® 2.0系统,目录编
号SNAP2MM),提高了WB实验的效率。
Western blotting的基本程序涉及下述关键步骤
样本制备
凝胶电泳
转膜
封闭非特异性结合
加入抗体
检测
Western Blot 实验流程图
Troubleshooting
问题 可能的原因 处理方法
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在保存抗体时请注意以下几点:
为保持比较大反应性,应按照厂家说明书保存试剂(如,当指定保存温度为2-8℃时,应避免将抗体置于室温下)。保存抗体的经验法则是将其置于非无霜冰箱/制冷机内的严格密封容器中,远离组织固定剂和交联试剂。除非加入稳定蛋白,如BSA(1% w/v),否则抗体不得
在工作液中长期保存。避免长期保存稀释的抗体。保存时遇到的主要问题是细菌或***污染。
如果抗体保存在2-8℃超过2-3天,建议进行过滤除菌和/或加入抑菌剂/防腐剂,如0.05%叠氮化钠或0.1%硫柳汞。 买组蛋白抗体哪家专业?虹口区MYC抗体抗体哪家优惠
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Troubleshooting
问题
微珠计数不足
本底过高
微珠不在制定的区域内或圈门中
整个微孔板的信号与本底相同
阳性对照的信号任样品信号过高或饱和
样品信号过低
样品和/或标准品CV值较大
微孔板洗板机吸液高度设置过低微珠混合物配制不当
样品颗粒物或粘度引起干扰
没有正确调整探针高度
本底孔受污染
洗涤不充分
Luminex*器没有正确校准或近期没有校准
没有正确词整门设置
微珠区域设置错误所用样品类型不正确*器没有洗涤或primed
做珠暴露于光下检测不正确或检测不到未加入抗体 杨浦区H3抗体抗体哪家好