河北高灵敏数字PCR服务

时间:2020年05月13日 来源:

数字PCR技术目前在糖尿病中的研究热点,通过定量检测非甲基化DNA的水平,对I型糖尿病β细胞死亡进行定量,从而监控病情发展。无创伤的产前诊断, 如21号染色体为3倍体的唐氏综合征、已知父母基因型的胎儿地中海贫血或胎儿遗传性耳聋基因检测等。目前无创检测标本来源主要为孕妇血液,而待检测的胎儿DNA受到母体DNA的干扰,影响了检测的准确性。数字PCR技术可以作为二代测序法的补充来进行无创伤产前诊断,从而提高工作效率、降低检测成本。 具有较好的科学素养及一定的教学、科研能力。培养具备生物科学的基本理论。河北高灵敏数字PCR服务

基因表达分析

伊马替尼(Imatinib)可以有效帮助很多慢性髓细胞白血病(CML)患者延长生存期,但是临床上发现,伊马替尼的疗效与BCR-ABL1融合基因的转录产物表达量有很大的关系。研究人员采用dPCR对CML患者的BCR-ABL1融合基因转录产物进行测定,结果检测下限可以达到0.001%,显示出dPCR在痕量核酸检测方面比qPCR具有无可比拟的优势[2]。

数字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一种核酸分子***定量技术。相较于qPCR,数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的***定量。 山西数字PCR定量分析服务一般大学都设在生命科学院内,与生物技术,生物工程是兄弟专业。

由于定量PCR的分析**终结果依赖于Cq值,2009年The MIQE Guides(Clinical Chemistry 55 :4 611-622)的发表明确了定量实验整个流程标准化的重要性,否则就会出现实验结果无法重复,甚至结果互相矛盾的状况。更重要的该文献还给出了如何规范定量PCR流程的checklist,其**目的就是在规范的实验流程、统一的设计思路下,得到的结果才具有可重复性,也具有可比性。

。为了避免上述传统PCR的缺点,并对基因的表达水平进行定量分析,1992年诞生了荧光定量实时PCR。

根据样品稀释分配方式不同,dPCR 技术可以分为三大类,一个是基于大规模集成微流控芯片(a),微反应室/孔板(b)和微滴式(c)。


目前市场上常见的2款dPCR仪器QuantStudio 3D 和QX200分别是基于微反应室(b)和微滴式(c)技术开发的,两者在检测参数上略微有些差异

此外,两者各自都有一些优缺点,比如,QuantStudio 3D运行需要ThermoFisher配套的芯片,但试剂可以通用;QX200运行不需要芯片但是需要Bio-Rad配套试剂;QX200 需要多次移液操作,容易产生是微滴融合,QuantStudio 3D一次只能加载一张芯片,操作相对繁琐等 Ct值就是指可以检测到荧光值对应的循环数;数字PCR是***的定量技术,基于单分子PCR方法来进行计数的核酸。

QX200目前已经是Bio-Rad的产品。Bio-Rad的技术主要来源于QuantaLife公 司,QuantaLife 利用油包水微滴生成技术开发了微滴式数字ddPCR,这是**早出现的相对成熟的数字PCR平台,在运行成本和实验结果稳定性方面都基本达到了商品化的标准。 2011年QuantaLife 公司被Bio-Rad公司收购,其微滴式数字PCR仪产品更名为QX100,继续在市场上销售,2013年该公司又推出了升级型号QX200。

PCR已经成为生命科学研究领域中**常规的实验方法之一。PCR是用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,可看作是生物体外的特殊DNA复制。PCR的比较大特点,是能将微量DNA大量扩增。 生物技术和生物工程没有实质性的差别,都是属于应用科学。等位基因突变数字PCR技术服务

主干学科:普通生物学 生物化学 分子生物学 细胞生物学。河北高灵敏数字PCR服务

微滴式数字PCR技术,是将样本通过微滴发生器进行微滴化处理,制成约2104个1nL体积的微滴后进行PCR反应。PCR反应结束后,使用微滴检测器对每个微滴逐个检测,**终经分析软件计算出目标DNA分子的浓度(copies/L)[2]。本研究选择人mtDNA两个编码基因ND4和16SrRNA,设计特异性引物与探针,与检测样本制成反应混合液,运用微滴式数字PCR技术,检测阳性反应的微滴并计数,达到同时进行种属鉴定和***定量的目的。1材料与方法1.1样本制备1.1.1人mtDNAND4基因片段重组质粒的制备和稀释根据人mtDNAND4基因全长参考序列河北高灵敏数字PCR服务

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