D-泛解酸内酯口碑推荐
早在1973 年,KING H L 等就研究发现一种来源于酿酒酵母的NADP(H)依赖型的酮泛解酸还原酶能够将酮泛解酸还原为D-泛解酸内酯,该酶在pH 7.0 条件下需要2.2 min 反应延滞期才会催化酮泛解酸内酯形成D-泛解酸内酯。1984 年,日本学者SHIMIZU S 等筛选了一系列能够还原酮泛解酸内酯形成泛解酸内酯的微生物菌种,其中小红酵母、不对称掷孢酵母、**滑假丝酵母、粟酒裂殖酵母、清酒酵母、黑曲霉和萱草丝衣霉菌能够催化酮泛解酸内酯形成D-泛解酸内酯。1987 年SHIMIZU S等利用氧化还原系统从消旋化的泛解酸内酯出发,经诺卡式菌选择性氧化L-泛解酸内酯生成酮泛解酸内酯, 后者经**滑假丝酵母不对称还原成D-泛解酸内酯。D-泛解酸内酯的工业制备是由DL-泛解酸内酯拆分而来的。D-泛解酸内酯口碑推荐
微生物选择性的不对称水解DL-泛解酸内酯中的D-泛解酸内酯,得到D-泛解酸,再将D-泛解酸进行内酯化生产D-泛解酸内酯。该方法工艺控制简单,微生物酶专一性好,可以得到高光学纯度的D-泛解酸内酯。
利用D-泛解酸内酯水解酶N末端序列,并根据NCBI中公布的D-泛解酸内酯水解酶cDNA序列设计了一个特异引物,该引物结合Oligo(dT)15,以串珠镰孢霉(Fusarium moniliforme)CGMCC 0536 mRNA反转录得到的总cDNA为模板进行扩增,获得约1.5kb左右的片段,将其克隆到T载体上进行测序,对测得的序列进行分析,重新设计了一对引物,并在引物两端分别加上限制酶EcoRI和SalI的识别位点序列,利用热启动PCR成功地扩增出了D-泛解酸内酯水解酶基因, 企业标准泛解酸内酯599-04-2中文别名:D(-)-泛酰内酯。
该项目采用的D-泛酸钙生产能力微生物酶催化拆分方法,与传统化学拆分方法相比,以生产D-泛醇为例,原材料消耗减少69.2%,废液、废渣排放分别减少65.5%、43.8%,能耗减少12.7%,生产成本降低了26.5%,同时,生物法改善了操作环境,提高了产品品质与产品安全性,提高了D-泛酸生产的整体技术水平,达到了用高新生物技术改造传统化学工业的目的。
D-泛解酸内酯水解酶具有高度的立体选择性,可立体专一拆分DL-泛解酸内酯,生成D-泛解酸。
D-泛解酸内酯的传统工业方法是化学拆分法和生物拆分法。
这两种方法生产过程复杂,拆分试剂制备回收繁琐,生产成本高。
探求其新的拆分方法,完善生产工艺,提高产品质量,一直成为研究者和生产者追求的目的。
实质上在拆分工艺的三种传统方法中(化学拆分、生物拆分、诱导拆分)。
生产D-泛酸钙进行了几十年的摸索,先后采用了诱导拆分DL-泛酸钙法、化学拆分D-泛解酸内酯法和生物拆分法。
生产D-泛酸钙,近年来拆分方法基本上统一到了生物拆分制备法。 D-泛解酸内酯主要用于D-泛酸钙和D-泛醇的合成。
化学酶法合成D-泛解酸内酯
泛酸具有一个手性中心,其中D-泛酸是工业生产所需要的。化学法合成D-泛酸(或泛酸钙)工艺成熟,但步骤繁琐且对消旋化产物进行结晶拆分费用昂贵。利用生物酶法生产光学纯的D-泛酸可进一步升级合成工艺,提升产品的竞争力。生物酶法主要包括利用生物菌体发酵生产和酶法催化。生物菌体发酵法利用基因工程技术在大肠杆菌、谷氨酸棒状杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母等宿主菌中表达泛酸生物合成基因和氨基酸生物合成基因,并利用基因工程菌进行微生物发酵,泛酸产量较高,但微生物发酵法发酵液成分复杂,后续的产物分离提取较困难。酶法催化可以替代化学反应过程中的某些步骤, 以化学酶法的方式来实现D-泛酸的前体物质D-泛酸内酯的生产。目前国内外酶法催化生产D-泛解酸内酯的方法主要包括酶法选择性拆分和酶法不对称合成。关于酶法不对称合成,笔者主要综述了三种路线:1) 前手性物质酮泛解酸或酮泛解酸内酯不对称还原成D-泛解酸内酯;2) 利用(R)-羟基腈裂合酶来合成泛解酸内酯前体羟基特戊醛;3) 醇脱氢酶参与的化学酶法合成D-泛解酸内酯。
D-泛解酸内酯是一种混旋泛酸钙的中间体。D+泛解酸内酯599-04-2
微生物拆分制备D—泛解酸内酯及用于生产D—泛酸钙与D—泛醇。D-泛解酸内酯口碑推荐
将D-泛解酸内酯水解酶cDNA结构基因分别插入到大肠杆菌胞内表达载体pTrc99a和分泌表达载体pET20b中,构建重组质粒pTrc99a-LAC和pET20b-LAC.将重组载体pTrc99a-LAC转化大肠杆菌JM109.重组菌在IPTG诱导下表达出有活性的重组酶,经SDS-PAGE检测,重组大肠杆菌有分子量约为40 kD的蛋白表达带,重组酶活力平均为39 U/克湿细胞.将分泌重组载体pET20b-LAC转化大肠杆菌BLR(DE3)pLysS,利用IPTG对重组菌进行诱导,D-泛解酸内酯水解酶被分泌表达至大肠杆菌的周质空间,信号肽被正确识别切下后,获得活性的D-泛解酸内酯。D-泛解酸内酯D-泛解酸内酯口碑推荐
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