广东贴壁细胞PEI转染试剂试用装

时间:2024年02月06日 来源:

接种细胞:转染前,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后,添加½体积的包含30%血清的生长培养基。关于转染试剂相关产品问题,欢迎咨询上海曼博生物!如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!如何优化PEI转染试剂转染时的比例?广东贴壁细胞PEI转染试剂试用装

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PEIMAX是一款高度浓缩的粉剂,大量科学家选择PEIMAX,在内部自行制备低成本高效益的PEI转染试剂。多年以来,经过众多业内人士评审的公开研究和出版文献表明,在HEK293、CHO和Sf9系统中可获得很高的转染效率,在重组抗体和病毒载体生产中稳定性高,可靠性强。PEIMAX是一种非GMP等级PEI转染试剂,适用于基础科学研究及药物研发早期阶段。Transporter5转染试剂是一种即用型线性聚乙烯亚胺转染试剂(PEI)衍生物。由PEIMAX配置而成的即用型无菌试剂,采用0.1μmPES无菌过滤器,完全消除支原体污染风险。适用于工艺开发、临床前和早期临床研究,可无缝过渡到MAXgene用于cGMP生产。如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!上海PEI转染试剂试用装适用于293细胞转染如何辨别假的PEI转染试剂。

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PEIMAX粉末配置方法:1)将1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃烧杯中;2)放入搅拌转子,放置于磁力搅拌器上,设置搅拌程序以形成一个较小的漩涡;3)等待PEIMAX40K完全溶解,通常需要5分钟左右;4)用25mL塑料移液管加入1N氢氧化钠滴定至pH6.9~7.1;5)如果不小心超过7.1,则使用1N的盐酸和新的塑料移液管将pH重新滴定至6.9~7.1;6)将溶液转移到1L玻璃量筒中,加入水定容至1L;7)用无菌真空过滤膜过滤配制的转染试剂溶液;8)按需分装,4°C储存(切记不可冷冻);注:未经配制的粉末有效期为2年。配置成液体后分装在合适的瓶子中,并且保存在4℃的转染试剂将可在6个月之内保持性能。如jin用于蛋白定性研究,分装的转染试剂可延长有效使用期至1年。如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!

准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL离心管。转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后,添加?体积的包含30%血清的生长培养基。更多关于Polysciences PEI相关内容欢迎咨询上海曼博生物!如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!​哪个品牌的PEI转染试剂性价比高?

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1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。4.对大多数细胞来而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1~4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。​如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!​PEI转染试剂能用于体内转染么?陕西全球PEI转染试剂试用装

用PEI转染试剂时,一般和DNA的比例是多少?广东贴壁细胞PEI转染试剂试用装

PEI在于可以应用于体内试验。当初试验经费很有限,被逼无奈只能放弃脂质体2000,选择PEI,以至于相当长的时间内,转染试验都不顺利。下面是几点关于PEI转染的注意要点:1.PEI的使用量可以参照脂质体2000的说明书,所用质粒尽量去内2.转染时,一定要把PEI+DMEM加入到质粒+DMEM中,顺序不可错,轻微混匀,静止20min3.转染后4小时,一定要换液!换含有FBS的完全培养液!因为PEI对细胞毒性太大4.如果后续试验涉及到稳定筛选,建议把血清浓度适当提高。PS:事实证明,PEI是可行的,已经做出稳定细胞系了。更多关于PEI转染试剂相关的信息,可咨询上海曼博生物医药科技有限公司!如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!广东贴壁细胞PEI转染试剂试用装

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