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外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理

已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤，这个时候考虑到得率，应该采用离心法处理，以减少过滤时的外泌体样品损失。

超滤方法纯化具体操作步骤举例

Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO)

用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]

用PBS平衡Amicon® Ultra-15 超滤管(目录号UFC901024,10 kDa MWCO) ，4000g离心 X 10 min。

从超滤管内管及收集管吸走PBS。向超滤管加入15 mL 样品。4000g 离心30 min 浓缩。倒空收集管。加入14 mL PBS 进行缓冲液置换，温柔吸打样品数次。4000g离心 30 min。从浓缩管吸回处理好的样品。(30X 浓缩)

注意 : 所有 Amicon® Ultra 超滤管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 与此操作流程兼容 * 益启生物公司专业致力于 超滤浓缩管代理销售。嘉定区默克0.5ml超滤浓缩管联系电话

核苷酸截留分子量（NCO）

超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的，适合各种蛋白研究，但在核酸

和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏

过，相对于球形蛋白需要更致密的膜（截留分子量更小）。所以选择

滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。

浓差极化

浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞，产生除了膜本身截留分

子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时，会形成相当于第二层滤膜作

用的胶体层，干扰分子通过滤膜，同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分

也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。

基于 Millipore® 先进的膜过滤技术，默克密理博开发了独特的腺***及慢***纯化与浓缩试剂盒。试剂盒中已经包括了必需的 Steriflip® 过滤装置和超滤管，能在短短 2 小时内安全、快捷地获得高产***。

节约时间：整个操作*需 2 小时。

产量高：***回收率超过 70%。

整体体验极好：流程简便而***质量高。

设计新颖易操作：Steriflip® 过滤装置可以替代昂贵的设备，使原本繁琐凌乱的操作变得简单而标准。

安全：封闭的真空抽滤设计，完全避免样品飞溅造

成的***污染和损失。

高浓度样品浓缩

Centriprep®超滤管

Centriprep®超滤管是一次性使用的离心管，可以用于2-15mL生物样品的纯化、浓缩、脱盐等过滤应用。这种离心超滤管流速很快，设计紧凑，螺旋盖使用起来非常方便，过滤收集管内置低吸附的Ultracel®再生纤维素膜，装有气密盖。

优点与应用

特有的反向流操作模式，较大的死体积

采用Ultracel®膜，用于浓缩和纯化富含颗粒物

的高浓度样品，样品回收率>90%

配合标准的50mL离心管吊篮式转子使用

从发酵培养基、细胞培养基、细胞裂解液中分

离低分子量溶质 超滤浓缩管和其他的空压机有什么区别呢？

近年来随着分离纯化技术的提高，关于外泌小体的研究成果颇丰；这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索，已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求，以及起始样品的规模、数量，可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒，对操作人员也没有特别的经验要求，超滤法后来居上，成为实验室中制备外泌体的通用方法。上海超滤浓缩管供应商。普陀区默克超滤浓缩管一级代理

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用超滤对分子进行分级

通过选定截留分子量的超滤操作能精确地将混在大分子中的小分子去

除的想法常常不切实际。事实上，膜的规格描述是基于截留而非通过

的性质。一项实验中，采用 100k NMWL 滤膜，大于 100kDa 的分子截

留率 >90%，但这时比膜孔径小的分子并不是完全自由地通过滤膜，

75kDa 的分子截留率为 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的

溶液中的各 种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实

践中，如果要分离两种大分子，它们之间的分子量差异应该达到 10 倍

以上，或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间，则可达到比较理想的

分离。如果蛋白溶液较为稀释，低压下操作也有助于达到更好的效果。 嘉定区默克0.5ml超滤浓缩管联系电话

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